El silenciamiento génico de la proteína ribosomal L19 bloquea la progresión del ciclo celular en Trypanosoma brucei

MARIA JIMENA MANZUR; JUAN MANUEL ZÁRATE; JURI AYUB M; GUILLERMO ALONSO

CABA

Congreso; XXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2015

Sociedad Argentina de Protozoología

La proteína ribosomal L19 forma parte de la subunidad mayor de los ribosomas eucariotas. En tripanosomátidos, dicha proteína posee, además del dominio canónico (PF01245), una extensión C-terminal de función desconocida. Con el objetivo de caracterizar funcionalmente esta proteína, generamos una línea de T. brucei que expresan de manera inducible un RNA interferente para L19. Luego de la inducción del RNAi con tetraciclina, corroboramos el correcto silenciamiento mediante Western Blot. Mediante ensayos de marcación metabólica demostramos que L19 es esencial en el proceso de traducción, ya que el silenciamiento de la misma provoca una disminución abrupta en la tasa de síntesis proteica (a las 24 hs), observándose posteriormente una caída en la proliferación celular (48 hs). La caracterización morfológica de los parásitos silenciados mostró un aumento del tamaño de los mismos respecto al control, y la presencia de núcleo, kinetoplasto y flagelo duplicados. Estos resultados sugieren que el silenciamiento de la proteína ribosomal L19 en T. brucei induce un bloqueo del ciclo celular, probablemente a nivel de la citocinesis, durante la entrada del surco de segmentación. En base a todo esto, proponemos que el bloqueo de la traducción tiene como efecto una disminución de la concentración intracelular de alguna/s proteína/s de vida media corta, esencial para completar el ciclo. En estudios futuros planeamos analizar qué etapa de la traducción y de la citocinesis es inhibida por el silenciamiento, y evaluar los niveles de proteínas involucradas en la progresión del ciclo celular mediante Western Blot e Inmunofluorescencia.