Caracterización de células dendríticas presentes en el microambiente tumoral de carcinomas mamarios humanos

MILITELLO, RODRIGO; CAMPOY, EMANUEL MARTÍN; GARCÍA SAMARTINO, CLARA; CEBRIÁN, IGNACIO; AGUILERA, MILTON OSMAR

Mendoza

Jornada; XXVI Jornadas de Investigación "avances y desafíos de la ciencia en pandemia"; 2020

Universidad Nacional de Cuyo

El impacto del infiltrado de células del sistema inmune en los tumores se ha debatido durante décadas. Estas células desempeñan funciones duales, pudiendo eliminar o promover la malignidad según las señales presentes en el microambiente tumoral (MAT). Una comprensión profunda de las distintas poblaciones de células dendríticas (DC) presentes en los tumores, permitirá plantear nuevas inmunoterapias contra el cáncer. Creemos que las DC que se encuentran en el MAT tienen un rol fundamental en el desarrollo del tumor mamario, es por ello que nos preguntamos ¿Cuáles son los distintos subtipos de DC en el MAT de carcinomas mamarios humanos y cuál es el perfil de maduración de las mismas? Nuestra hipótesis es que existen diferentes subpoblaciones y perfiles de maduración de DC en el MAT y que estos perfiles se asocian con rasgos tumorales de carcinomas mamarios. Proponemos como objetivo general aislar DC del MAT de carcinomas mamarios y determinar la proporción de los distintos subtipos, así como sus perfiles de maduración y la asociación con rasgos tumorales. Los objetivos específicos son: 1- Aislar y separar células tumorales y no tumorales del estroma tumoral, a partir de la disgregación enzimática de carcinomas mamarios mediante citometría de flujo. 2- Caracterizar subpoblaciones de las DC obtenidas previamente e identificar el estado de maduración de las mismas utilizando marcadores específicos. 3- Estudiar la asociación de los perfiles detectados con rasgos clínico-patológicos de los tumores y de las pacientes. Metodología. Objetivo 1 -Se realiza la disgregación enzimática a partir de carcinomas mamarios humanos mediante incubación a 37°C durante 18 h. Luego se obtiene una suspensión celular, que es incubada con anticuerpos (Ac) específicos EpCAM y HLADR. Luego por citometría de flujo se identifican y separan las subpoblaciones EpCAM+/HLADR- (células tumorales) y no tumorales (EpCAM-/HLA-DR+). Para el objetivo 2 partimos de las DC asiladas previamente, se las marca con Ac específicos para analizar la expresión de los marcadores CD14, CD1c, CD11c y MHC-II (HLA-DR). Estos marcadores permiten identificar las DCs convencionales cDC1 y cDC2. Mediante el uso del cell sorter se separa cada subpoblación, caracterizándola. En el objetivo 3, a partir del análisis anatomopatológicos y de inmunohistoquímica del tumor, generaremos bases de datos para estudiar la asociación de los rasgos tumorales y los perfiles de activación/maduración obtenidos del microambiente tumoral. Resultados: Pudimos aislar con elevada pureza células tumorales y no tumorales, además logramos caracterizar subpoblaciones de cCD1 y cCD2 en el MAT por medio de citometría deflujo.