Regulación de la internalización de Coxiella burnetii por CD44 y ezrina

ORTIZFLORES,RODOLFOMATIAS; DIFRESCO,CAROLINAPAOLA; DISTEL,JESÚSSEBASTIÁN; BERÓN, WALTER

Mendoza

Jornada; XXVI Jornadas de Investigación SIIP'20; 2020

Secretaría de investigación, Internacionales y Posgrado. UN de Cuyo

La fagocitosis es un complejo proceso que comienza con el reconocimiento e interacción de la partícula con receptores presentes en la membrana plasmática de la célula hospedadora. Posteriormente, reorganizaciones del citoesqueleto de actina guiarán la membrana alrededor de la partícula permitiendo la internalización y, posteriormente, formación del fagosoma. Coxiella burnetii (Cb) es un patógeno intracelular obligado, agente causal de la fiebre Q. Cb es fagocitada por la célula hospedadora a través de los receptores αvβ3 y αMβ2 y el citoesqueleto de actina. Sin embargo, este mecanismo está poco descripto. Se ha demostrado que CD44 puede participar en el proceso fagocítico como receptor principal o como co-receptor de la integrina αMβ2. Además, CD44 interacciona con moléculas asociadas al citoesqueleto de actina como las proteínas ERM (Ezrina, Radixina y Moesina). Estas proteínas, luego de su reclutamiento a la membrana plasmática y fosforilación, permiten el anclaje de los microfilamentos de actina a receptores de membrana. El objetivo de este estudio es determinar el rol de CD44 y las proteínas ERM en la internalización de Cb. Para ello, células HeLa fueron silenciadas para CD44 e infectadas con Cb por 6 h. Las células fueron procesadas para inmunofluorescencia indirecta y analizadas por microscopía confocal para determinar el número de bacterias adheridas e internalizadas. Observamos que el silenciamiento de CD44 produjo una disminución de los niveles de internalización de Cb, sin afectar su adherencia a la célula hospedadora. En base a este resultado y a la relación CD44-ezrina, decidimos analizar el reclutamiento de ezrina a la membrana plasmática durante la infección. Para esto, se aislaron las fracciones celulares citosol y membrana obtenidas de células HeLa infectadas durante diferentes periodos de tiempo. Posteriormente se determinó la localización de ezrina mediante Western Blot en ambas fracciones. La proteína fue reclutada gradualmente a la membrana hasta los 60 minutos para luego comenzar a disminuir. Se conoce que la activación de las proteínas ERM se asocia con su fosforilación. Para analizar el estado de fosforilación de las proteínas ERM durante la infección con Cb, células HeLa fueron infectadas durante diferentes períodos de tiempo, lisadas y analizadas mediante Western Blot. La infección con Cb indujo la fosforilación de las proteínas ERM mostrando niveles máximos entre 60 y 90 minutos post-infección. Estos resultados indican que CD44 participa en la internalización de C. burnetii a la célula hospedadora junto con el reclutamiento a la membrana plasmática y fosforilación de ezrina durante dicho proceso.