Caracterización de PEDF y VEGF en modelos de estudio de ratón

TANIA ESTEFANIA SAEZ LANCELLOTTI; MARIA INES CONTE; MIGUEL WALTER FORNES; MARIA ANGELES MONCLUS

Otro; XXXI REUNIÓN ANUAL VIRTUAL SOCIEDAD CHILENA DE REPRODUCCIÓN Y DESARROLLO; 2020

SOCIEDAD CHILENA DE REPRODUCCION Y DESARROLLO

El factor derivado de epitelio pigmentario PEDF es una serinproteasa antiapoptótica, antioxidante y antiangiogénica presente en múltiples tejidos. A nivel de aparato reproductor femenino se reconoció como responsable de la ovulación a partir de su antagonismo con el mediador proangiogénico conocido como factor de crecimiento de endotelio vascular VEGF, y el grupo de trabajo describió su dependencia androgénica en aparato reproductor de ratas WISTAR macho. Interesa extrapolar su estudio a modelos murinos en situaciones in-vivo e in-vitro. Desde el modelo celular comenzar con adición exógena de PEDF con la finalidad de evaluar la funcionalidad en el modelo celular. Se utilizaron ratones macho C57bl/6 para evaluar la expresión de PEDF y VEGF en testículo y epidídimo en sus porciones caput, corpus y cauda a partir de ensayos inmunes de inmunohistoquímica y western blot. Para el estudio in vitro se utilizaron células MEPC5, células principales de caput epididimario distal de ratón, en las que se complementa la distribución por medio de fluorescencia. En testículo se localizó en epitelio seminífero la expression de PEDF y VEGF, sin embargo fuera del mismo VEGF se ubica en las células de Leidig y PEDF en las peritubulares, partón discordante con el obtenido en ratas Wistar por el grupo de trabajo previamente. En epidídimo se observan ambos en todo el tracto, en PEDF predomina la señal en citoplasma, y a proximal (a distal muestra señal nuclear), mas en el caso de VEGF la visualización es mayor a partir de cuerpo epididimario aumentando a distal con localización citoplásmica y nuclear heterogénea. El modelo celular fue validado y expuso una señal de PEDF intensa y granular en citoplasma con realce a nuclear, VEGF demostró un patron similar más atenuado. A partir de ésta ultima, los análisis preliminares en MEPC5 con PEDF recombinante en 50 y 100Nm, expuso aumento del índice metabólico del modelo celular. Los resultados iniciales han de ser completados a posteriori con ensayos de citotoxicidad para evaluar propiedades oxidativas de VEGF/PEDF en epidídimo in vitro