Misma forma, diferentes genes: herramientas moleculares para diferenciar larvas de digeneos en la glándula digestiva de huéspedes ampuláridos

DELLAGNOLA FEDERICO; GENTILE, LAURA; VEGA, ISRAEL A

Bahía Blanca

Congreso; 3er. Congreso Argentino de Malacología. Universidad Nacional del Sur - Bahía Blanca - Argentina; 2019

Asociación Argentina de Malacología

La glándula digestiva de algunos individuos de caracoles ampuláridos están parasitadas por larvas (esporocistos y redias) de platelmintos trematodos (Digenea). Esas formas larvales se disponen, alimentan y reproducen entre los acinos y espacios hemolinfáticos del órgano huésped, y desarrollan partenogenéticamente larvas nadadoras (cercarias) que abandonan al caracol para buscar al siguiente huésped del ciclo de vida. La taxonomía clásica de los trematodes se basa en la morfología de los adultos presentes en el huésped definitivo, por el contrario, la identificación de las formas larvales en moluscos debe ser abordada con un enfoque molecular. En el lago Regatas de Buenos Aires, donde coexisten tres especies de ampuláridos (Pomacea canaliculata, P. scalaris y Asolene platae) encontramos que una cercaria xifidiocerca (portadora de un estilete en la ventosa oral utilizado para penetrar el exoesqueleto del siguiente huésped intermediario) es específica del género Asolene. Además, por la secuenciación y reconstrucción filogenética a partir de dos genes con diferentes tasas evolutivas (el gen que codifica para la subunidad mayor del ribosoma eucariota, rRNA 28S; y el gen que codifica para el espaciador inergénico transcribible ITS I) mostramos que la xifidiocercaria es cercana al género Phaneropsolus (Xiphidiata). Por otra parte, encontramos xifidiocercarias muy similares en forma y tamaño en la glándula digestiva de Pomacea americanista (Ihering, 1919), una especie de ampulárido endémica de distribución muy restringida en el Alto Paraná e Iguazú en Misiones (Argentina). Pusimos entonces a prueba la hipótesis que ambos morfotipos larvales corresponden a entidades biológicas diferentes. Utilizando la información molecular de la xifidiocercaria de Asolene, inicialmente predijimos in silico los sitios de corte de dos enzimas de restricción, EcoRI y HindII. Amplificamos por PCR ambos genes a partir de material genético de ambas xifidiocercarias aisladas de ambos huéspedes. El amplicón del gen que codifica el rRNA 28S de la xifidiocercaria de A. platae mostró un tamaño ligeramente menor que la xifidiocercaria de P. americanista (~1250 versus ~1300 pb). Ambas xifidiocercarias mostraron un único sitio de corte con la enzima EcoRI, con una banda mayor de diferente tamaño (~850 y 900 pb) y una banda menor conservada (~400 pb) para A. pulchella y P. americanista, respectivamente. La digestión de este amplicón con HindIII mostró mayor variabilidad; tres bandas de diferente tamaño para la xifidiocercarias de Asolene (~600 500 y 250 pb) y la xifidiocercarias de P. americanista (~1100, 350 y 250pb), respectivamente. Los amplicones del ITS I de ambas xifidiocercarias mostraron tamaños diferentes; ~900 pb de la xifidiocercarias de A. platae y ~650 pb de la xifidiocercarias de P. americanista. Además, el amplicón de la xifidiocercaria de A. platae mostró dos sitios de cortes, la cual fue evidenciada con la presencia de tres bandas de tamaño menor a 300 pb, y dichos sitios de cortes estuvieron ausentes en la xifidiocercaria de P. americanista. El amplicón del ITS I tiene dos sitios internos posibles de corte para la enzima EcoRI y un único posible sitio (muy proximal) de corte para la enzima Hind III. En síntesis, este trabajo muestra que las xifidiocercarias de ambos huéspedes ampuláridos son entidades biológicas diferentes y abre la posibilidad de distinguir especies crípticas de parásitos trematodes.