ACCIÓN DE UNA NEUROTOXINA BOTULÍNICA PROVENIENTE DE UNA CEPA DE CLOSTRIDIUM BOTULINUM DE MENDOZA SOBRE CÉLULAS DE CARCINOMA MAMARIO

CARVELLI L; SOSA MA; CABALLERO P; SOSA PAREDES E; CHAPANA A

Ciudad autónoma de Buenos Aires

Congreso; XV CONGRESO ARGENTINO DE MICROBIOLOGÍA (CAM 2019); 2019

Asociación Argentina de Microbiología

Introducción y Objetivos: La neurotoxina botulínica (NTBo) producida por Clostridium botulinum, causante del botulismo, es también utilizada para el tratamiento de múltiples enfermedades neurológicas, especialmente la del serotipo A. Actualmente se está evaluando su potencial acción en la terapia del cáncer. En estudios previos hemos demostrado que las NTBo serotipo A provenientes de cepas autóctonas de suelos (Su) poseen características diferentes a la de la cepa de referencia A Hall, esta última es la utilizada en el fármaco Botox ®. Entre esas características encontramos una mayor actividad tóxica específica (AE), importantes diferencias en la estructura molecular y en la actividad enzimática frente a proteínas SNARE.Materiales y Métodos: Se utilizaron dos NTBos serotipo A en sus complejos nativos, una proveniente de la cepa de Su 1935 y la otra de la cepa A Hall, ambas purificadas por precipitación salina. Se les determinó AE (DL50/mg proteína) (Reed y Muench/ Lowry) y se estudió las características electroforéticas en condiciones no desnaturalizante (nativa) en geles de poliacrilamida al 6%. Las células MCF7 de carcinoma mamario se cultivaron en cubreobjetos e incubaron con 250 y 500 DL50 de las NTBos durante 10, 25, 45 y 90 min respectivamente. Luego de las incubaciones, las células fueron fijadas y permeabilizadas con saponina. Como anticuerpos primarios se utilizaron anti-tubulina o anti-Golgina 97 y como secundario se utilizó un anti mouse- Alexa 488. Los núcleos fueron teñidos con Hoescht y los preparados visualizados mediante microscopía de fluorescencia.Resultados: A los 90 min de incubación con 250 DL50 de NTBo se observó que ~90 % de las células se desprendieron y deformaron por la acción de la NTBo de Su 1935 y ~40% para la NTBo A Hall, mientras que con 500 DL50 ambas toxinas fueron deletéreas para las células. Cuando las células fueron incubadas con las toxinas durante 25 min se observó una mayor desorganización celular con la NTBo de Su 1935 que con la A Hall, manifestándose en una redistribución del aparato de Golgi y la aparición de múltiples zonas con alta densidad de marcación de tubulina. En todos los casos las células testigo permanecieron normales.Conclusiones: Estos resultados muestran una acción citotóxica de las NTBo con desorganización de los microtúbulos celulares, observándose con mayor intensidad en las células tratadas con la NTBo proveniente de la cepa autóctona de Su. Por otra parte, estudios preliminares de nuestro laboratorio mostraron que la NTBo de Su 1935 degrada actina de homogenatos de cerebro de rata. A partir de este estudio se abren perspectivas de investigación particulares frente a la escasa literatura sobre el efecto de NTBo serotipo A en células tumorales y su mecanismo de acción.