ESTUDIO DEL ROL MODULADOR DE LA PROTEÍNA VIRAL TAT EN LA REACCIÓN ACROSOMAL

PACHECO GUIÑAZÚ, AB; RESA, L; BEAUMELLE, B; BELMONTE, SA; MASONE, D; ALTAMIRANO, K

Mendoza

Jornada; Pre Jornadas de Jovenes Investigadores; 2017

Secretaria de Ciencia , Técnica y posgrado (SECTYP). Universidad Nacional de Cuyo

La proteína Tat del HIV es un factor de transcripción viral (15kDa) queparticipa en la replicación activa del virus.El virus solo ingresa a los LTCD4. Se ha demostrado que TAT ingresa a las células no infectadas por endocitosis ejerciendo en ellas efectos nocivos. En células cromafines inhibe la neurosecreción. La RA es una exocitosis regulada por calcio, gatillada en respuesta a un estímulo fisiológico o farmacológico, e involucra el desprendimiento del gránulo acrosomal localizado en la cabeza de la gameta. El objetivo del trabajo es dilucidar si la proteína Tat del HIV-1 es capaz de ingresar a espermatozoides humanos afectando la exocitosis acrosomal y consecuentemente la fertilización.La proteína Tat del HIV-1 es internalizada por espermatozoides humanos. Nuestra hipótesis es que el efecto en la fertilidad observado en los pacientes infectados por HIV se debe a que la proteína atraviesa membranas de células no endocíticas, como el espermatozoide, y dañan la secreción del acrosoma. Para dilucidar esta hipótesis, incubamos 20× 106 células durante 2h con diferentes concentraciones de la proteína recombinante TatWT: 5nM, 10nM y 25nM y 100 nM para observarla por inmunofluorescencia (IFI). Para asegurar que la proteína detectada por WB esta dentro de la célula y no unida a la membrana externa, se trataron las gametas con tripsina eliminando así la proteína no internalizada.El residuo W11 es requerido para el anclaje de Tat a las membranasde espermatozoides humanos. Algunos estudios en modelos celulares noendocíticos señalan al residuo W11 como un aminoácido crucial para el anclajede la proteína a membrana. En este ensayo incubamos 20× 106 células durante2h con 10nM de TatWT o de la mutante TatW11Y, quereemplaza el residuo de triptófano por uno de tirosina. Sin ser expuestas a digestión con tripsina, las muestras fueron procesadas para su análisis por WB (Fig6). No se observó marcación para la mutante TatW11Y, lo que sugiere que la proteína fue incapaz de unirse a las membranas de las gametas. Esto indicaría que el residuo W11 de la proteína Tat del HIV-1 es requerido para que se una a la membrana de losespermatozoides.