IHEM   20887
INSTITUTO DE HISTOLOGIA Y EMBRIOLOGIA DE MENDOZA DR. MARIO H. BURGOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Participación de los cuerpos multivesiculares en la vía de presentación cruzada de antígenos de células dendríticas
Autor/es:
CEBRIAN, IGNACIO; MAYORGA, LUIS S.; CROCE, CRISTINA
Lugar:
Mendoza
Reunión:
Jornada; II Jornada de Estudiantes de Ciencias Exactas y Naturales; 2017
Institución organizadora:
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad Nacional de Cuyo
Resumen:
Las células dendríticas (DC) juegan un rol central en el montaje de respuestas inmunes específicas contra antígenos foráneos. Además participan en el proceso de desarrollo de inmunidad adaptativa siendo el blanco de estimulación de los adyuvantes utilizados en las vacunas. Dada su vital importancia en estos procesos, tanto las DC como los mecanismos moleculares que éstas utilizan para procesar y presentar antígenos en su superficie son ampliamente estudiados en la actualidad para el diseño de nuevas vacunas. Para la presentación antigénica las DC incorporan antígenos por endocitosis, los procesan y retornan a la superficie celular asociados con moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de clase II para el desarrollo de una respuesta humoral, o asociados al MHC de clase I en lo que se conoce como presentación cruzada. Este segundo modo de presentación ha demostrado ser crucial para asegurar una inmunidad citotóxica contra patógenos, células tumorales y virus que no infectan DC. Para una eficiente presentación cruzada, la vía endocítica de las DC posee múltiples características especiales (Joffre et al. 2012). La etapa del transporte endocítico, conocida como ?sorting? o ?distribución?, es especialmente compleja permitiendo el direccionamiento del material incorporado hacia los lisosomas o hacia vías de reciclaje, desde donde se produce un transporte bidireccional con la vía secretora, mayormente con la red del trans-Golgi. El direccionamiento de las macromoléculas hacia su destino final depende de complejas maquinarias que por un lado deforman la membrana de los endosomas, y por otro reclutan moléculas específicas en microdominios de membranas que adquieren propiedades particulares. Su poder de asociación diferencial a distintas proteínas y componentes lipídicos de la membrana del endosoma les permite llevar a cabo la regulación de esta función de manera coordinada y eficiente para que cada molécula alcance correctamente su destino (Henne et al. 2011). El objetivo principal de nuestro estudio fue investigar el papel potencial de la formación de cuerpos multivesiculares (MVB) durante la presentación cruzada de antígenos. Para lograr esto, enfocamos nuestro trabajo en la maquinaria ESCRT, las proteínas mejor caracterizadas que generan vesículas intraluminales en la red endocítica. Utilizamos como antígeno modelo la proteína ovoalbúmina (OVA), tanto soluble como asociada a bead de látex, y el parásito intracelular Toxoplasma gondii. Inicialmente, observamos un fuerte defecto en la presentación cruzada de antígenos cuando las DC fueron tratadas con el inhibidor U18666A, que interfiere con la síntesis de colesterol y la formación de los MVB (Figura 1). A continuación, mediante inmunofluorescencia indirecta (IFI) y microscopía confocal encontramos que en presencia del inhibidor U18666A se redujo el reclutamiento de la tetraspanina CD63 (marcadora de los MVB) a la vacuola parasitófora (PV) de T. gondii (Figura 2). Finalmente, logramos determinar un claro reclutamiento de la proteína CHMP4b (componente central del complejo ESCRT III) a la PV luego de la infección de DC con T. gondii (Figura 3). En conjunto, estos resultados sugieren por primera vez que los MBVs son reclutados eficientemente a la vacuola que contiene T. gondii y que la formación de MVBs es esencial para la presentación cruzada eficaz del antígeno. Nuevos estudios nos permitirán comprender con mayor detalle las interacciones complejas que este parásito establece con los MBVs y el papel de la maquinaria ESCRT en este proceso.