Edad, masculinización y contaminantes ambientales en Pomacea canaliculata.

GIRAUD BILLOUD, M; CASTRO-VAZQUEZ, A

Mendoza

Taller; Sexto Taller Biología de Ampullariidae.; 2017

Grupo POMACEA - Argentina

El desarrollo de un vaso deferente y/o un pene por la exposición a disruptores endócrinos (EDs) ha sido evidenciado en hembras de más de 300 especies de vetigasterópodos, neogasterópodos y litorinimorfos, y ha sido denominado ?imposex?. Las hembras de Ampullariidae difieren de todas ellas porque presentan normalmente un aparato copulatorio rudimentario (ApCop). Este rudimento se origina poco después de la eclosión y permanece casi sin cambios hasta la madurez sexual, pero puede después continuar su desarrollo en edades más avanzadas. Este trabajo estuvo orientado a: (1) evaluar el desarrollo del ApCop en hembras de diferentes edades (juveniles hasta adultas), expuestas o no a EDs, (2) poner a prueba hipótesis derivadas del ?imposex? en otros gasterópodos, sobre posibles factores desencadenantes del desarrollo ulterior del ApCop en hembras, y (3) evaluar la expresión del receptor de retinoides X (RXR) como posible efector final de la masculinización.Trabajamos con animales de diferentes edades de nuestra cepa Rosedal. En las hembras juveniles solo determinamos la presencia de las glándulas de la vaina peneana (% de hembras con glándulas). En las hembras adultas cuantificamos el desarrollo del ApCop utilizando el largo de la vaina peneana (PSL) y del pene (PL), y un ?índice de desarrollo? (DI) determinado por la presencia y desarrollo de estructuras propias del ApCop. Los EDs fueron inyectados a hembras juveniles, de 10 mm de largo (estadío genitalmente indiferenciado), las que fueron sacrificadas a los 15 mm (comienzo de la diferenciación genital). En las hembras adultas estudiamos primero el efecto de la edad posterior a la madurez sexual, y así seleccionamos la edad de 4 meses como la óptima para la administración de los diversos EDs, y se las sacrificó un mes después. Los compuestos administrados en una primera serie de experimentos fueron (1) tributilestaño (TBT) y trifenilestaño (TPT), que son reconocidos EDs, ácido 9 cis-retinoico (9cisRA), que es el agonista endógeno del receptor de retinoide X (RXR). La dosis (1μg/gr peso escurrido) fue administrada una sola vez. En hembras juveniles, tanto TBT, TPT como 9cisRA aumentaron significativamente el % de hembras con glándulas comparadas con las controles. En hembras adultas no tratadas observamos que los indicadores de masculinización (longitud de la vaina y el índice de desarrollo) aumentaron significativamente en las hembras de edad avanzada (7 y 8 meses) comparadas con las más jóvenes (4 y 5 meses).Las hembras adultas tratadas con todos los compuestos estudiados a los 4 meses (y sacrificadas a los 5 meses) mostraron aumentos significativos de la PSL, PL e DI en comparación con las controles no tratadas. Debe destacarse que este efecto de dosis única es un efecto de switch-on, ya observado como irreversible en otros gasterópodos.Por tanto, probamos en hembras de 4 meses si compuestos activos en otras especies, como el neuropéptido APGWamida, propuesto como penis morphogenetic factor, el andrógeno testosterona y la rosiglitazona (agonista del receptor PPARγ, vinculado funcionalmente al RXR) podían manifestar un efecto similar de switch-on. Además de los controles administrados con vehículo, se utilizaron hembras inyectadas con TBT y 9cisRA como controles positivos, y solo estas últimas respondieron, mientras que los otros compuestos fueron inefectivos en P. canaliculata. Dado que solo los agonistas del RXR habían sido efectivos, se evaluó la expresión del RXR en hembras inyectadas con 9cisRA, la que resultó aumentada.Nuestros resultados indican que los mecanismos subyacentes a la masculinización en P. canaliculata están relacionados al RXR y que la edad de los individuos deber ser atendida en la evaluación de experimentos de campo.