OTAVIRUS: ESTUDIO IN VITRO DEL EFECTO ANTIVIRAL DEL ÁCIDO URSÓLICO

GIMENEZ MARÍA CECILIA; DELGUI LAURA RUTH; PERALTA ANDREA; THOMÉ JULIETA; COLOMBO MARÍA ISABEL

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Virología; 2017

Asociación Argentina de Microbiología

ROTAVIRUS: ESTUDIO IN VITRO DEL EFECTO ANTIVIRAL DEL ÁCIDO URSÓLICOTohmé M J1 2, Gimenez M C2 3, Peralta A4, Colombo M I2, Delgui L R21Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad Juan Agustín Maza, Mendoza, Argentina. 2IHEM-CONICET, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad Nacional de Cuyo. Mendoza, Argentina. 3Facultad de Veterinaria y Ciencias Ambientales. Universidad Juan Agustín Maza, Mendoza, Argentina. 4INTA-CONICET, Buenos Aires, Argentina.Rotavirus (RV) es uno de los principales agentes etiológicos de gastroenteritis aguda en niños. En los casos más severos puede producir la muerte por deshidratación, siendo los países en vías de desarrollo los más afectados. En Argentina se ha incorporado la vacuna anti-RV al Calendario Nacional de Vacunación a partir del año 2015. Sin embargo, hasta la actualidad no existe un tratamiento específico para las infecciones por RV que colabore en disminuir el impacto de tales afecciones. El ácido ursólico (AU) es un compuesto triterpénico pentacíclico presente en diversas familias de vegetales que posee efectos biológicos como antiinflamatorio, anticancerígeno y antimicrobiano. Basándonos en esto nos hemos propuesto evaluar la actividad antiviral del AU en infecciones in vitro por RV.Nuestro modelo de estudio consta de la línea celular MA104 y la cepa de RV de simio, SA-11. Incubamos las células con 10 μM y 20 μM de AU durante 8, 12 y 24 h, y determinamos la viabilidad celular mediante la evaluación cuantitativa de la actividad enzimática mitocondrial. Observamos un alto grado de viabilidad incluso tras 24 h de incubación con 10 μM de AU. Luego, para descartar un efecto directo del AU en las partículas virales, pre-incubamos los viriones de RV con 15 μM AU y posteriormente infectamos monocapas celulares. La progenie viral fue titulada y comparada con preparaciones de virus control. Así, hemos descartado el efecto virucida del compuesto y procedido a evaluar su capacidad de interferir con el ciclo replicativo del virus. Para tal fin realizamos infecciones virales en células pre-tratadas, y en continua presencia de AU 10 μM durante 15 h. Luego, titulamos la progenie viral intra- y extra-celular y observamos una disminución significativa del título viral en presencia de AU. Por otra parte, las monocapas infectadas fueron analizadas para cuantificar la acumulación de las proteínas mayoritarias del virus, VP6 y VP7, que fue menor en las células tratadas, reforzando el resultado del efecto antiviral de AU. Finalmente, hemos llevado a cabo experimentos orientados a determinar la/s etapa/s del ciclo replicativo interferidas por el AU. Para ello, incubamos las células antes y durante la adsorción e internalización viral (?etapas iniciales?) o durante las 15 h de infección (?etapas replicativas?). Evaluamos el resultado mediante titulación de viriones infectivos intra- y extra-celulares. Hemos observado que el AU presenta actividad interferente tanto en la internalización como en la replicación de RV y que ambos colaboran en la acción antiviral demostrada por nuestro grupo.Por último, hemos comenzado el estudio del mecanismo por el que el tratamiento de las células con AU interrumpe el ciclo replicativo de RV. Hasta la actualidad, nuestros resultados indican una drástica afectación de la arquitectura del complejo de Golgi, hecho que nos ha motivado a estudiar, en detalle, el papel de dicha organela en el ciclo infectivo de RV, desconocido hasta la actualidad.