Expresión y purificación de la proteína ¨Cysteine String¨ (CSP) y su role en la exocitosis acrosomal de espermatozoides humanos

KARINA FLORES MONTERO; MARIA VICTORIA BERBERIAN; CELESTE RUETE

MENDOZA

Jornada; XXV Jornadas de Jóvenes Investigadores.; 2017

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CUYO

ResumenLa exocitosis o reacción acrosomal (RA) permite la liberación del contenido del acrosoma facilitando el pasaje del espermatozoide a través de la zona pelúcida para la fecundación del ovocito. Este proceso requiere el acercamiento y aposición de las membranas plasmática y acrosomal, de manera que puedan fusionarse. La fusión de membranas ocurre por medio de la formación de complejos SNAREs. La formación de los mismos está regulada por proteínas chaperonas. Una de estas chaperonas es la cysteine string protein (CSP). El objetivos de este trabajo fue determinar la presencia, localización y función de CSP en espermatozoides humanos; así como también, expresar y purificar la proteína CSP en bacterias para poder realizar ensayos con CSP recombinante exógena y avanzar en el estudio de las vías de señalización que conducen a la RA. Nuestros resultados demostraron la presencia de CSP en espermatozoides humanos por medio de la técnica analítica de western blot. También demostramos la localización de esta chaperona, por medio de inmunofluorescencia indirecta, en la región acrosomal del espermatozoide. Además, utilizando un modelo de espermatozoides permeabilizados con estreptolisina O, determinamos que CSP es requerida durante la RA. Por otro lado, transformamos bacterias Escherichia coli competentes con el plásmido codificante para la proteína CSP. Produjimos y purificamos con éxito la proteína recombinante CSP por cromatografía de afinidad en resina de glutatión-sefarosa.Palabras claves: cyesteine string protein, chaperonas, exocitosis acrosomal, espermatozoides