Munc18-1 regula el ensamble de las SNAREs en la reacción acrosomal en espermatozoide humanos

TOMES C; BRANHAM MT; BUSTOS M; RODRIGUEZ JF; ROGGERO CM; ZARELLI V

Mendoza

Jornada; XXI Jornada de investigación III Jornadas de posgrado de la Universidad Nacional de Cuyo; 2008

Universidad Nacional de Cuyo

La reacción acrosomal es un tipo de exocitosis regulada dependiente de calcio que le permite al espermatozoide penetrar la zona pellucida del ovocito. Munc18-1 es una proteína hidrofílica que pertenece a la familia Sec1/Munc18 y  junto con las SNAREs constituyen dos familias de proteínas esenciales para la exocitosis. Posee un rol controvertido en el proceso exocítico. Un modelo propone que une y secuestra a sintaxina-1 en su conformación “cerrada”, lo cual inhibiría la exocitosis. Otro modelo propone que Munc18-1 promueve y acelera la formación de complejos SNAREs. Una vez demostrada su presencia y localización por medio de Western blot e inmunofluorescencia indirecta, así como su requerimiento en etapas posteriores al tethering dependiente de Rab3A y previo a la salida de calcio acrosomal, nuestros objetivos fueron estudiar la función de la proteína endógena y el mecanismo por el cual la proteína recombinante es inhibitoria. Mediante el uso de ensayos funcionales en un modelo de espermatozoides humanos permeabilizados con estreptolisina O establecimos que la proteína endógena actuaría regulando el ensamble de las SNAREs. Gracias a la utilización de tres estrategias diferentes demostramos que la proteína recombinante  posee un rol inhibitoria en la RA, ya que secuestra a sintaxina-1 en su conformación monomérica. Por lo tanto concluímos que Munc18-1 está presente en espermatozoides humanos, posee localización en la región acrosomal, actúa en etapas posteriores al tethering mediado por Rab3A y previo a la salida de calcio acrosomal. La proteína endógena actúa regulando el ensamble de las SNAREs mientras que la proteína recombinante inhibe la RA por secuestro de sintaxina-1 monomérica.