Biosíntesis de epitopes con reactividad cruzada dentro de la glicoproteína hemaglutinina de influenza A

JAVIER G. MAGADAN

Córdoba

Otro; Curso Teórico de Doctorado - Universidad Nacional de Córdoba; 2017

CIBICI-CONICET, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba

La variación antigénica dentro del dominio globular de la glicoproteína hemaglutinina (HA) del virus de la influenza A (IAV) impide una efectiva reacción inmunológica contra este importante patógeno humano. Aunque otro dominio, el "stem" de HA, se encuentra muy conservado entre las distintas cepas del virus de la gripe, los anticuerpos anti-HA que reaccionan contra el "stem" (StRAbs) se consideraron por mucho tiempo biológicamente inertes. Sin embargo, hoy en día es claro que los StRAbs no sólo reducen la replicación viral en modelos animales sino que también protegen contra la patogenicidad viral, lo que demuestra el enorme potencial de posibles inmunógenos basados en el "stem" de HA para la preparación racional de vacunas. Para esto, se requiere una completa comprensión de la estructura y antigenicidad del "stem" de HA para lograr un óptimo diseño de inmunógenos inductores de StRAbs. En este trabajo, estudiamos la biogénesis de los epitopes que forman parte del "stem" de HA en un modelo de células infectadas con diversas cepas del IAV H1N1, utilizando StRAbs murinos y humanos. Encontramos que los StRAbs se unen con una alta avidez tanto a monómeros de HA en el Retículo Endoplásmico (ER) como a HA trimerizada en el complejo de Golgi (GC). Aunque los epitopes del "stem" de HA están rodeados por N-oligosacáridos, su antigenicidad no depende completamente del estado de glicosilación de este dominio. Sin embargo, a medida que los N-glicanos aumentan de tamaño durante el transporte intracelular de HA a través del GC, la reacción StRAb-HA se vuelve dependiente de la temperatura, con un pico de reactividad a 37ºC. Diseñamos y utilizamos una pequeña proteína de tan sólo 65 residuos que mimetiza a los StRAbs y se une al "stem" de la HA, pero independientemente de la temperatura, lo que tendría lugar en este caso por la falta de impedimento estérico ofrecido por los N-oligosacáridos regionales. Asimismo, los StRAbs se unen a HA recombinante que contiene N-glicanos sencillos de una manera independiente de la temperatura. Nuestros resultados demuestran además que los N-oligosacáridos del dominio "stem" de HA influyen probablemente en la unión a los StRAbs por efectos locales directos en lugar de modificar globalmente la flexibilidad conformacional de HA. Estos hallazgos indican que la reacción StRAb-HA es débil, lo que aumenta la posibilidad de que, bajo suficiente presión inmunológica, el dominio "stem" de HA podría seleccionar mutaciones que generen "mutantes virales de escape" gracias a un aumento en la tasa de impedimento estérico ofrecidos por los N-glicanos circundantes