EL DIACILGLICEROL REGULA LA RESPUESTA AUTOFÁGICA INDUCIDA POR Staphylococcus aureus.

GAURON, MC; COLOMBO, MI

Rosario

Congreso; XIII Congreso Latinoamericano de Microbiología. XIV Congreso Argentino de Microbiología.; 2016

ALAM-CAM

La autofagia es un proceso celular degradativo en respuesta al estrés provocado por limitaciones nutricionales, altas temperaturas, estrés oxidativo, acumulación de organelas dañadas o infección con ciertos patógenos. Durante este proceso, partes del citoplasma, organelas y en algunos casos microorganismos son encapsulados en vacuolas de doble membrana llamados autofagosomas, los cuales se fusionan con lisosomas para digerir el material secuestrado. Algunos patógenos son capaces de modificar la vía autofágica para sobrevivir en la célula hospedadora y poder replicarse, uno de estos patógenos es Staphylococcus aureus, un microorganismo causante de enfermedades serias como neumonía, endocarditis, osteomielitis e infecciones de heridas. En nuestro laboratorio hemos demostrado que la toxina α-hemolisina (Hla) es la responsable de la respuesta autofágica inducida por S. aureus, la cual es usada por el microorganismo para escapar de su fagosoma contenedor marcado con la proteína autofágica LC3. Además hemos demostrado que la respuesta autofágica inducida por esta bacteria es independiente de la vía canónica de PI3K/Beclina1 y se encuentra regulada en cambio por la vía del AMPc el cual activa a EPAC y Rap2b. Ésta última proteína activa a la fosfolipasa C (PLC), enzima que es capaz de generar diacilglicerol (DAG) y fosfatidilinositol-1,4,5-trifosfato (IP3) por hidrólisis de fosfatidilinositol-4,5-bifosfato (PIP2). Estas dos moléculas producidas son importantes segundos mensajeros que participan en varias vías de señalización que gobiernan el comportamiento de la célula. El principal objetivo del presente trabajo fue estudiar el DAG, su blanco directo la familia de proteínas proteína quinasa C (PKC) y su implicancia en la autofagia inducida por S. aureus. Para esto, utilizamos células CHO, las transfectamos con plásmidos para nuestras proteínas de interés y posteriormente realizamos infecciones de 4 horas con la cepa de S. aureus wt (01016), S. aureus mutante deficiente de α-hemolisina (Hla-) (01017) o la mutante Hla- de S. aureus complementada con un plásmido para α-hemolisina (Hla-+pHla) (01018). Para describir la implicancia de DAG en la internalización de nuestro patógeno, estudiamos su localización intracelular ante la infección con las tres cepas y vimos que se encuentra asociado a los fagosomas contenedores de S. aureus y que este reclutamiento ocurre de manera independiente de Hla. Luego, por medio de cotransfecciones de las PKCs con LC3 y posterior infección con la cepa wt y las dos mutantes para α-hemolisina de S. aureus, vimos que estas quinasas son capaces de inhibir el reclutamiento de LC3 a la vacuola contenedora de la bacteria perjudicando a su vez su replicación intracelular. De hecho, encontramos que una de las isoformas de PKC se recluta, de una manera dependiente de Hla, al fagosoma de S. aureus, impidiendo que LC3 lo haga. Todos estos resultados nos sugieren que la vía de transducción de señales del segundo mensajero DAG se encuentra regulando negativamente la autofagia inducida por el patógeno intracelular Staphylococcus aureus, de manera que tiene un papel muy importante en la respuesta antimicrobiana del hospedador ante la infección de este microorganismo.