Actividad proteasa tipo tripsina en el lumen intestinal de Pomacea canaliculata

GODOY, MARTÍN S.; CASTRO-VAZQUEZ, ALFREDO; ESCOBAR CORREAS, SOPHIA; VEGA, ISRAEL A.

Mendoza

Congreso; Segundo Congreso Argentino de Malacología; 2016

Asociación Argentina de Malacología

Pomacea canaliculata (Lamarck, 1822) es un molusco de agua dulce con un tracto digestivo bien desarrollado. Su estrategia de alimentación es generalista consumiendo una variedad de ítems alimentarios compuestos por polisacáridos y proteínas. La digestión extracelular de proteínas ocurre gracias a la presencia de varias serín-proteasas luminales (28kDa, 30kDa, 145kDa, 198kDa) distribuidas diferencialmente a lo largo del intestino y de aminopeptidasas de membrana asociadas a la pared intestinal. Las dos glándulas asociadas al intestino, salivares y digestiva, sintetizan y secretan serín-proteasas de 125 kDa y 30 kDa, respectivamente. Esta última se distribuye en forma ubicua en los diferentes contenidos intestinales (buche, saco del estilo e intestino contorneado), y a nivel celular se encuentra específicamente asociada a los corpúsculos simbióticos (identificados como C y K) que viven y se reproducen en las células epiteliales de la glándula digestiva. En este trabajo buscamos la presencia de serín-proteasas en el proteoma del simbionte de P. canaliculata y evaluamos la actividad enzimática a lo largo del intestino usando sustratos generales y específicos de proteasas. El proteoma del simbionte ?C? fue construido mediante la combinación secuencial de citometría de flujo, espectrometría de masas (MALDI-TOF-MS) y análisis de secuencias de aminoácidos por BLAST-p. Este estudio mostró tres tipos de secuencias de aminoácidos compatibles con una cisteín-proteasa, una amino-peptidasa y una serín-proteasa. Esta última mostró una secuencia de 23 aminoácidos cuyo dominio conservado fue identificado como perteneciente a la familia de las tripsinas. Los estudios bioquímicos mostraron además, que los contenidos del buche, saco del estilo e intestino contorneado presentan una importante actividad proteasa (azocaseína, sustrato general), la cual aumenta en dirección aboral. Esta actividad fue específica en presencia del sustrato Nα-Benzoil-L-arginina-4-nitroanilida (BAPNA, específico para tripsina). Estos hallazgos sugieren que el simbionte de P. canaliculata tiene diferentes proteasas, pero sólo una de ellas es compatible a nivel molecular con la familia de las tripsinas y compatible con la actividad enzimática específica (BAPNA) observada a lo largo del intestino.