Progesterona induce una onda de Ca2+ intracelular a través de un mecanismo independiente de CatSper en espermatozoides de humano. 4to Congreso

SOSA CM; DE BLAS, GA; POBLETE, S; ARIAS R; MAYORGA LS

Bariloche

Congreso; SAMIC; 2016

SAMIC

Durante la capacitación el espermatozoide adquiere una preparación para sufrir la reacción acrosomal (RA), un evento esencial para la fertilización en mamíferos. La progesterona producida por el cúmulus del ovocito se ha asociado con varios procesos de la fisiología del espermatozoide, incluyendo la RA. El acrosoma es una vesícula secretora localizada en el extremo apical de la cabeza del espermatozoide que contiene enzimas líticas en su interior. Durante la RA -un evento exocítico, regulado y calcio dependiente- la membrana acrosomal externa y la membrana plasmática se fusionan en múltiples sitios lo que permite la liberación de las enzimas líticas presentes en el acrosoma. El espermatozoide expone así nuevos componentes de membrana requeridos para que se fusione con el ovocito. La RA está orquestada por una compleja cascada de señalización, cambios en la permeabilidad iónica e incremento del calcio citoplasmático provocado tanto por ingreso desde el espacio extracelular como por la salida de reservorios intracelulares [1]. Durante la RA se produce una activación de la maquinaria de fusión de membranas [2], hinchamiento del gránulo acrosomal y formación de vesículas híbridas para la posterior liberación de la matriz del acrosoma. Trabajos previos han demostrado que progesterona (Pg) activa de manera directa un canal de Ca2+ llamado CatSper, que se localiza exclusivamente en la membrana plasmática de la cola de espermatozoides. Pg abre este canal y dispara un incremento rápido de calcio intracelular. Este ión es crucial para la fisiología del espermatozoide tales como la capacitación, la hiperactivación y la RA [3]. El objetivo de este trabajo es estudiar la acción de Pg en medios con diferente concentración de calcio extracelular ([Ca2+]e) para identificar blancos de la hormona que provoquen un incremento de Ca2+ intracelular ([Ca2+]i) no relacionados a CatSper. Para cumplir con este objetivo realizamos ensayos dinámicos en células individuales -en tiempo real con alta resolución espacial y temporal- y en población utilizando un espectrofluorómetro. Los espermatozoides de humano capacitados se cargaron con diferentes sondas fluorescente de calcio -Fluo3-AM y Fura2-AM-. Para identificar en qué etapa de la fisiología del espermatozoide participaría este fenómeno, realizamos estudios de RA y evaluamos parámetros de movilidad. Una vez que los espermatozoides se cargaron con las sondas de Ca2+ se incubaron en medios con diferentes concentraciones de [Ca2+]e y finalmente se trataron con Pg. Observamos que en ausencia de [Ca2+]e Pg provoca un incremento de [Ca2+]i que comienza en la pieza media y cuello y se propaga hasta la región apical de la cabeza. Además observamos que este incremento de la [Ca2+]i generado por la salida del ión desde los reservorios intracelulares no es suficiente para inducir la RA. Estos resultados nos indican que Pg puede activar la salida de Ca2+ de reservorios intracelulares por un mecanismo independiente de CatSper [3].