Acumulación de gotas lipídicas tras la infección por el Virus de la Bursitis Infecciosa Aviar

YESICA R. FRONTINI LÓPEZ; MARINA UHART; LAURA RUTH DELGUI; DIEGO F. MASONE; J.F. RODRÍGUEZ; MARÍA CECILIA GIMENEZ; DIEGO M. BUSTOS; MARÍA ISABEL COLOMBO

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM 2016; 2016

Comité Organizador del XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM 2016

El Virus de la Bursitis Infecciosa Aviar (IBDV), miembro mejor caracterizado de la familia Birnaviridae, es el agente etiológico de la enfermedad de Gumboro, una afección inmunosupresora severa que afecta a individuos del género Gallus gallus, ocasionando graves pérdidas en la industria avícola en todo el mundo. Las gotas lipídicas son organelas constituidas por un núcleo de lípidos neutros rodeado por una monocapa de fosfolípidos y proteínas insertas en su superficie. Estas organelas están involucradas en la regulación del metabolismo lipídico, así como también participan en la protección de las células de los efectos perjudiciales de lípidos citotóxicos y proteínas anormalmente plegadas. Existen evidencias que sugieren que su formación está asociada a la eliminación celular de proteínas no plegadas desde el lumen del retículo endoplásmico. En relación a los virus, se ha demostrado, tanto para el virus de la Hepatitis C como para el virus del Dengue, un fuerte requerimiento de estas estructuras para el éxito de sus ciclos replicativos.Nuestro objetivo consistió en analizar los niveles de gotas lipídicas en células susceptibles tras la infección por IBDV. En primer lugar, analizamos los niveles de estas organelas empleando la tinción con el colorante Oil Red O mediante microscopía de fluorescencia a distintos tiempos post infección (4, 12, 24 y 48 h p.i). La cuantificación relativa de gotas lipídicas en células infectadas se realizó mediante un algoritmo de procesamiento de imágenes, desarrollado en nuestro laboratorio. A su vez, con el fin de observar la morfología de las gotas lipídicas realizamos un análisis ultraestructural de las células infectadas mediante microscopía electrónica de trasmisión. Por último, analizamos la distribución subcelular de las estructuras virales en relación a las gotas lipídicas a 48 h p.i., mediante microscopía confocal.Hemos determinado que a partir de las 12 h p.i. existe un aumento en el número de gotas lipídicas en las células infectadas en relación a las que no han tenido contacto con el virus, y que este aumento progresa con el tiempo de infección. Este resultado fue corroborado observando, a nivel ultraestructural, la abundancia y mayor tamaño de estas organelas en células infectadas. Cuando analizamos la distribución de las estructuras virales observamos que no existe colocalización subcelular entre las gotas lipídicas y los componentes proteicos mayoritarios del virus .Estos datos demuestran que desde tiempos tempranos p.i. se observa una fuerte acumulación de gotas lipídicas en las células infectadas. El progreso en la acumulación a tiempos más tardíos p.i. sugiere que se trata de un efecto dependiente de la infección viral. La ausencia de colocalización entre las proteínas estructurales mayoritarias del virus y las gotas lipídicas también sugiere que la acumulación observada sería un efecto secundario de la infección viral, probablemente una respuesta de defensa celular innata.