Estudio de las proteínas adaptadoras AP2 en eventos de excitotoxicidad

TRONCOSO,ME; ASENSIO, J; SELTZER, AM; SOSA MA

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y Reunión Científica Anual de La Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); 2015

SAIC- SAFIS

Antecedentes: La endocitosis mediada por vesículas cubiertas con clatrina es un proceso crucial para el mantenimiento de la integridad neuronal. La cubierta de las vesículas tiene proteínas adaptadoras. AP2 es un heterotetrámero formado por subunidades alfa, beta2, μ2 y d2. En el tejido nervioso se han descrito dos isotipos de alfa, alfa1 y alfa2, y su coexistencia aún no ha sido explicada. Objetivos: Estudiar el comportamiento de ambas subunidades alfa en neuronas, en modelos animales o en líneas celulares, sometidos a diferentes condiciones de excitotoxicidad. Metodología: Cultivos de líneas celulares: neuronas estriatales; StHdhQ7 (normales) y StHdhQ111 (con extensión poliglutamina típica de la enfermedad de Huntington), fueron tratadas con 250 uM de ácido quinolínico (AQ) durante 3 o 6 hs. Las células fueron procesadas para estudios de IFI, o de inmunoblot, utilizando un anticuerpo anti AP2. Animales: se realizó una lesión por hipoxia isquemia (HI) a ratas (Wistar Kyoto) de 7 días de edad. El tejido cerebral se extrajo a los 5 días postlesión. Para evaluar la presencia de proteínas docking para AP2 en membranas de cerebro de ratas o de las células, se realizaron ensayos de binding con AP2 obtenidas de cerebro bovino. Resultados: En células se observaron (por IFI y WB) diferencias en la expresión de AP2 entre ambas líneas celulares, siendo menor en las Q111, pero con una distribución perinuclear que colocaliza con golgina. El tratamiento con AQ indujo cambios en ambas líneas celulares; con una redistribución dispersa, pérdida de colocalización con golgina y un aparente aumento de la expresión en las Q111. En animales se observó un aumento de AP2 en la corteza de HI del lado contralateral, y una tendencia similar en hipocampo. En los ensayos de binding se observó que la subunidad alfa1 tiene afinidad por membranas, la cual es menor en la corteza de animales HI. Concluimos que la maquinaria endocítica podría ser alterada por la excitotoxicidad.