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La exocitosis del gránulo secretorio del espermatozoide o reacción acrosomal (RA) es un evento altamente regulado esencial para la fertilización. Comienza con una entrada de calcio desde el medio extracelular, continúa con la síntesis de AMP cíclico y la activación de Epac. Aquí, la cascada de señalización se bifurca en una rama encabezada por Rab3-GTP, que conduce al ensamblado de lamaquinaria de fusión y otra dirigida por Rap-GTP, que moviliza calcio desde el acrosoma. Para dilucidar el mecanismo que conecta estas dos ramas utilizamos inhibidores de la RA en tres tipos de abordaje: a)ensayos funcionales reversibles, b) inmunofluorescencia para detectar la activación de Rab3 y Rap, y c)microscopía confocal para visualizar las fluctuaciones de calcio en reservorios intracelulares. En espermatozoides humanos permeabilizados con estreptolisina O y estimulados con calcio, la inhibición causada por reactivos que impiden la activación de Rap se revirtió forzando farmacológicamente lamovilización de calcio desde el acrosoma, mientras que la causada al impedir la unión de GTP a Rab3 no se revirtió. Concluimos que ambas ramas de la cascada exocítica se conectarían cerca o en el paso catalizado por Rab3 de una manera unidireccional. La rama que conduce a la movilización de calcio desde el acrosoma estaría inicialmente subordinada a la rama que lleva al ensamblado de la maquinaria de fusión. En algún punto situado después de Rab3 las vías se volverían independientes.