La familia de las GTPasas Rho participa en la formación del compartimiento de la célula hospedadora donde se replica Coxiella burnetii.

SALINAS, R,; ROSALES, E,; AGUILERA, M; BERÓN, W

Mendoza, Argentina

Jornada; IX Jornadas de Investigación. Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de Cuyo.; 2007

Secretaría de Ciencia, Técnica y Postgrado, FCM, U.N. de Cuyo

Coxiella burnetti es el agente etiológico de la fiebre Q en humanos. C. burnetti es un patógenos intracelular obligado que genera un gran compartimiento replicativo en la célula hospedadora, llamado vacuola parasitófora (VP). Previamente hemos observado que actina esta involucrada en la formación de la VP. La dinámica de actina es regulada por la familia de las GTPasas Rho. Para probar si estas GTPasas participan en la biogénesis de las VP, células HeLa se infectaron con C. burnetti y posteriormente se transfectaron con los plásmidos pEGFP-Cdc42, -RhoA o -Rac1 tipo salvaje (WT), las respectivas mutantes dominantes positivas (activa) y negativas (inactiva). C. burnetti se detectó por inmunofluorescencia indirecta. Las células se analizaron por microscopia confocal. Se analizó la localización de las proteínas fluorescentes en la VP y la distribución de tamaño de dichas vacuolas. Se observó que Cdc42 WT y su mutante positiva V14 se reclutó en la VP, mientras que la mutante negativa N17 permaneció difusa en el citosol. Se observó un incremento en el tamaño de las VP formadas en células que sobreexpresaron la mutante positiva V14, sin observarse diferencias en aquellas que expresaban la WT y las mutante negativa N17. RhoA WT y su mutante V14 se asociaron a la membrana de la VP, no así la mutante N17. El tamaño de la VP disminuyó en células que sobreexpresaron la proteína WT y la mutante positiva, observándose un efecto más dramático con la mutante negativa. Rac1wt o sus mutantes no se asociaron a la VP y el tamaño de la VP no se alteró por la sobreexpresión de dichas proteínas. Las VP se caracterizan por ser un compartimiento maduro ya que presenta marcadores típicos de endosomas tardios y un pH ácido que se puede evidenciar por la acumulación del marcador fluorescente Lysotracker. Para estudiar si la expresión de las proteínas de la familia Rho altera el grado de madurez de la VP se incubaron las células con ese marcador y se determinó la colocalización VP-Lysotracker. En todos los casos se observó un alto grado de colocalización.   Estos resultados sugieren que Cdc42 y RhoA están involucradas en la biogénesis de la VP sin alterar su grado de madurez.