Munc18-1 es requerida para la reaccion acrosomal en espermatozoides humanos

RODRIGUEZ AYALA JF; TOMES CN

Buenos Aires

Congreso; V Congreso Argentino de Andrologia; 2007

Sociedad Argentina de Androlog¨ªa

Munc18-1 es requerida para la reacci¨®n acrosomal en espermatozoides humanos Rodriguez Ayala JF, Tomes CN Lab. de Biolog¨ªa Celular y Molecular. IHEM. Facultad de Medicina. Universidad Nacional de Cuyo. Mendoza, Argentina. frodriguez@fcm.uncu.edu.ar. La reacci¨®n acrosomal es un tipo especial de exocitosis regulada dependiente de calcio. La fusi¨®n en m¨²ltiples sitios entre la membrana acrosomal externa y la membrana plasm¨¢tica produce la liberaci¨®n del contenido acrosomal y p¨¦rdida de membrana, condici¨®n para que el espermatozoide penetra la cubierta extracelular glucoproteica del ¨®vulo (zona pellucida). La exocitosis est¨¢ controlada por una maquinaria proteica muy conservada, entre ellas: GTPasas de la familia Rab, NSF, ¦Á-SNAP y SNAREs. Munc18-1 es una prote¨ªna hidrof¨ªlica con forma de arco que posee un rol controversial en la exocitosis. Un modelo propone que une y secuestra a sintaxina-1 en su conformaci¨®n ¡°cerrada¡±, lo cual inhibir¨ªa la exocitosis. Otro modelo propone que Munc18-1 promueve y acelera la formaci¨®n de complejos SNAREs in vitro. Nuestro objetivo consiste en demostrar la presencia de Munc18-1 en espermatozoides humanos, demostrar que cumple un rol importante en la exocitosis  acrosomal y establecer la/s etapa/s modulada/s por Munc18-1 en la misma. Por medio de t¨¦cnicas de Western blot se demostr¨® la presencia de una prote¨ªna con peso molecular entre 66 y 68 kDa, correspondiente a Munc18-1 en extractos de espermatozoides humanos utilizando extractos de cerebro y la prote¨ªna recombinante como control positivo. Por medio de inmunofluorescencia indirecta de demostr¨® su localizaci¨®n acrosomal. Se demostr¨® su rol esencial en la exocitosis acrosomal mediante ensayos funcionales usando un modelo de espermatozoides humanos permeabilizados con estreptolisina O desarrollado por nuestro laboratorio, el cual permite el ingreso a la c¨¦lula de iones, anticuerpos, toxinas, etc. Se ubic¨® su requerimiento en una etapa posterior al tethering dependiente de Rab3A y previa a la salida de calcio acrosomal. Por lo tanto concluimos que Munc18-1 est¨¢ presente en espermatozoides humanos, posee localizaci¨®n acrosomal y es requerida para la exocitosis del acrosoma disparada por calcio y Rab3A en etapas relativamente tard¨ªas de la cascada.