EL DOMINIO EFECTOR DE MARCKS INHIBE LA EXOCITOSIS ACROSOMAL EN ESPERMATOZOIDES HUMANOS

RODRIGUEZ PEÑA M; MAYORGA L.S.; MICHAUT, M

Mendoza, Argentina

Congreso; IX Jornada de Investigación; 2007

Secretaria de Ciencia y Técnica, Facultad de Ciencias Médicas, Univesidad Nacional de Cuyo

MARCKS es el principal sustrato in vivo de Proteína kinasa C (PKC) en varios tipos celulares, no obstante su presencia en espermatozoides como un posible sustrato de PKC no ha sido investigada. Usando un anticuerpo específico contra MARCKS, el análisis por Western blot reveló que MARCKS se expresa en espermatozoides humanos y los ensayos de inmunofluorescencia indirecta mostraron su localización en la región acrosomal. Estos resultados sugirieron que MARCKS podría participar en la EA. Para probar esta hipótesis expresamos el Dominio Efector de MARCKS (DE-MARCKS) unido a GST (GST- DE-MARCKS) y lo ensayamos en el modelo de espermatozoides permeabilizados con Streptolisina O. Los resultados muestran que GST-DE-MARCKS inhibe la EA estimulada por activadores de este proceso tales como PMA, calcio y Rab3A. Para dilucidar si la fosforilación de MARCKS podría modular estos resultados preparamos también mutantes de DE-MARCKS constitutivamente fosforilado y no fosforilado. Resultados preliminares indican que sólo la mutante constitutivamente no fosforilada del Dominio Efector es capaz de inhibir la EA estimulada por calcio. Estos resultados revelan que MARCKS se expresa en espermatozoides humanos y sugieren que la participación de MARCKS en la EA estaría regulada por la fosforilación de su Dominio Efector