El citoesqueleto de actina y su relación con el mecanismo de internalización del Virus de la Bursitis Infecciosa Aviar

GIMENEZ MARÍA CECILIA; RODRÍGUEZ FRANCISCO JOSÉ; COLOMBO MARÍA ISABEL; DELGUI LAURA RUTH

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología II Congreso Latinoamericano de Virología; 2015

Asociación Argentina de Microbiología

0175 EL CITOESQUELETO DE ACTINA Y SU RELACIÓN CON EL MECANISMO DE INTERNALIZACIÓN DEL VIRUS DE LA BURSITIS INFECCIOSA AVIAR MC Gimenez1 4, JF Rodríguez2, MI Colombo1 4, LR Delgui1 3 1 Instituto de Histología y Embriología Mendoza(UNCuyo-CONICET), Mendoza, Argentina. 2 Centro Nacional de Biotecnología-CSIC, Madrid, España. 3 Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, UNCuyo, Mendoza, Argentina. 4 Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad Juan Agustín Maza, Mendoza, Argentina. El Virus de la Bursitis Infecciosa Aviar(IBDV), miembro de la familia Birnaviridae, es el agente etiológico de la Enfermedad de Gumboro, infección inmunosupresora que afecta a individuos jóvenes del género Gallus gallus ocasionando graves pérdidas económicas en la industria avícola.Al inicio del ciclo de replicación, la mayoría de los agentes virales son internalizados en la célula hospedadora mediante la vía endocítica. El citoesqueleto de actina es un regulador clave de ciertas rutas endocíticas, siendo la dinámica de polimerización y despolimerización de los microfilamentos de actina un evento que subyace la formación de proyecciones de la membrana plasmática características de las vías endocíticas dependientes de actina. Diversos virus son capaces dealterar la homeostasis del citoesqueleto de actina durante su internalización en las células. El objetivo de nuestro trabajo de investigación consistió en estudiar el papel del citoesqueleto de actina y sus proteínas reguladoras, las GTPasas Rho, en la internalización de IBDV. Empleamos los agentes despolimerizantes del citoesqueleto de actina Citocalasina D y Latrunculina B para estudiar su efecto en la internalización de IBDV. Determinamos el porcentaje de células infectadas mediante microscopía confocal y los niveles de la proteína viral VP3 mediante Western blot luego de infectar las células pre-tratadas con los agentes. Realizamos estudios ultraestructurales mediante microscopía electrónica de trasmisión para estudiar la morfología de la internalización viral, tanto en células con el citoesqueleto íntegro como en aquellas pre-tratadas con los agentes. A su vez, utilizando microscopia confocal, analizamos la alteración en el citoesqueleto de actina asociada al proceso de internalización viral. Finalmente, sobreexpresamos versiones mutantes dominante-negativa de las proteínas reguladores del citoesqueleto de actina Rho A, Rac-1 y Cdc42 y analizamos su efecto sobre la entrada del virus en las células transfectadas. Hemos observado que el pre-tratamiento de las células con Citocalasina D y Latrunculina B afecta drásticamente la internalización de IBDV. Además, comprobamos que el citoesqueleto de actina resulta totalmente desorganizado de forma transciente durante la internalización, revirtiendo luego de esta. Por otro lado, la sobreexpresión de las proteínas mutantes dominante-negativas de Rho A y Rac-1 afectaron negativamente la infección de IBDV. El conjunto de datos obtenidos ha permitido demostrar el importante papel de los filamentos de actina y de sus proteínas reguladoras, las GTPasas Rac-1 y Rho A, durante el proceso de internalización de IBDV. A su vez, hemos demostrado que la internalización de IBDV conlleva la completa desorganización del citoesqueleto de actina. En conclusión, estos resultados apoyan a la vía macropinocítica, proceso endocítico altamente dependiente del citoesqueleto de actina, como la principal involucrada en la entrada de IBDV en las células.