La GTPasa Arf6 y el citoesqueleto de actina están involucrados en la fagocitosis de Coxiella burnetii.

BENITO, J; CARMINATI, S; BERÓN, W.

Mendoza

Jornada; IX Jornadas de Investigación. Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de Cuyo.; 2007

Secretaría de Ciencia, Técnica y Postgrado de la U.N. de Cuyo

La fagocitosis es el proceso por el cual células fagocíticas internalizan patógenos que son transportados hacia lisosomas para ser degradados. Particularmente, Coxiella burnetii es una bacteria intracelular obligada que sobrevive y se replica en un compartimiento acídico con características lisosomales denominado vacuola parasitófora (VP). El citoesqueleto de actina tiene un rol fundamental  en fagocitosis ya que participa en la formación de pseudópodos en al membrana plasmática de la célula hospedadora, necesarios para la internalización de microorganismos. Se ha observado que la proteína ARF6 regula dinámica del citoesqueleto de actina a través de PIP5 kinasa y proteínas Rac. ARF6 es una GTPasa monomérica que pertenece a la familia Ras. Como toda GTPasa se encuentras en estado activo unida a GTP o en estado inactivo unida a GDP. Hemos observado, en resultados previos, que las VP formadas en células infectadas con C. burnetii reclutan actina. Considerando la interacción de la VP con actina y que Arf6 regula fagocitosis y el citoesqueleto de actina nos propusimos estudiar si dicha proteína regula la fagocitosis y el tráfico intracelular de C. burnetii.  Para ello células HeLa se transfectaron con plásmidos que expresan ARF6 cepa salvaje (WT), una mutante dominante  positiva (Q67L) y una mutante dominante negativa (T27N), unidas a hemaglutinina o a la proteína fluorescente verde (EGFP), y luego de 6 h se infectaron con C. burnetii. Las células se fijaron y se procesaron para inmunofluorescencia indirecta utilizando un anticuerpo específico para detectar C burnetii. Las células se analizaron por microscopía de fluorescencia y confocal. Observamos que en células transfectadas que sobreexpresan  la mutante negativa T27N se inhibió significativamente la internalización de la bacteria en comparación a lo observado en células que sobreexpresaba la proteína WT y en células control transfectadas con pEGFP. Estos resultados sugerirían que ARF6 regula el proceso de fagocitosis de  C. burnetii