LOCALIZACIÓN, AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE PROTEÍNAS ESPERMÁTICAS CON GRUPOS TIOLES DURANTE EL TRÁNSITO EPIDIDIMARIO

CABRILLANA M E; MONCLUS M A; VINCENTI A E; FORNES M W; YUNES R

Fac. Cs. Méd., UNCuyo - Mendoza

Jornada; IX Jornadas de Investigación Facultad de Ciencias Médicas, UNCU; 2007

Secyt - FCM - UNCuyo

LOCALIZACIÓN, AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE PROTEÍNAS ESPERMÁTICAS CON GRUPOS TIOLES DURANTE EL TRÁNSITO EPIDIDIMARIO. Cabrillana ME, Monclus MA, Vincenti AE, Fornés MW, Yunes R. IHEM, FCMédicas. UNCuyo - CONICET. Mendoza. ryunes@fcm.uncu.edu.ar  La oxidación de proteínas tiólicas se relaciona con la motilidad, capacitación, reacción acrosomal y fertilización en el espermatozoide.  Este proceso de oxido reducción de tioles (SH) a puentes disulfuro (S-S), es verificado durante el tránsito epididimario. Usando diferentes metodologías nos disponemos a caracterizar proteínas ricas en SH. Primeramente por sonicación y ultracentrifugación en gradientes de sacarosa, fraccionamos y separamos cabezas y colas de espermatozoides. Luego comparamos espermatozoides maduros con inmaduros para establecer que proteínas específicamente sufren cambios de SH-SS. Las proteínas del espermatozoide  son tratadas con detergentes y analizadas de acuerdo a su solubilidad. Todas las muestras son incubadas con mBB que permite marcar los SH. A través de microscopía de fluorescencia y electrónica podemos determinar la ubicación subcelular de las mismas.  Las proteínas tiólicas fueron separadas por SDS-PAGE y se determinó su peso molecular. Obtuvimos banda proteica de 27 Kda, que emite fluorescencia como así también la porción principal de la cola, observada en microscopía de fluorescencia y electrónica. Podemos evidenciar el proceso de oxidación de grupos tioles a S-S ocurrido en el tránsito epididimario. El cual pudo revertirse con  agentes reductores. En adelante intentaremos localizar en que estructura específica del espermatozoide se encuentran estas proteínas.