Un estudio de los simbiontes intracelulares, afines molecularmente al agente causal de la rinosporidiosis, y de sus huéspedes gasterópodos

FEDERICO A. DELL AGNOLA; ROMINA MORENO; ISRAEL A. VEGA

Mendoza

Jornada; XIII Jornadas de investigación de la facultad de Ciencias Médicas (UNCuyo); 2014

Facultad de Cs. Médicas - UNCuyo

INTRODUCCION La existencia de corpúsculos pigmentados en cenogasterópodos es conocida desde la descripción de Leydig. En Pomacea canaliculata se conocen desde los trabajos de Meenakshi, aunque hasta hace sólo unos pocos años fueron interpretados como elementos excretorios. Nuestros estudios han consolidado una interpretación alternativa: Los corpúsculos serían elementos simbióticos vegetativos ("C") y quísticos ("K") procariotas, aún de incierta posición filogenética, pero que en base a sus pigmentos (feofórbidos de clorofila a y b) y a la secuenciación del gen rRNA 16S se encontraría incluido dentro del clado "cianobacteria-cloroplasto". Además, hemos mostrado que la misma secuencia está presente en los huevos del hospedador y que los simbiontes aparecen a los siete días post-eclosión, lo que sugiere transmisión vertical. Se trataría, entonces, de una nueva endosimbiosis, hasta ahora desconocida, de un organismo procariota pigmentado con un molusco, y de las pocas conocidas con animales. Más allá de su importancia teórica, es conocido el rol de los moluscos dulceacuícolas como vectores de enfermedades de importancia médica. Dentro de los estudios filogenéticos, hemos encontrado que la secuencia del gen rRNA 16S del simbionte es prácticamente idéntica (>98%) a la homóloga encontrada en Rhinosporidium seerberi. Éste es el microorganismo propuesto como agente etiológico de la rinosporidiosis, una enfermedad granulomatosa, crónica, no contagiosa, que produce hiperplasia en las membranas mucosas humanas. Dado que la enfermedad está asociada a pacientes que toman baños regulares en aguas dulces, como estanques, pozos de agua, y lagos, es plausible que el hombre encuentre gasterópodos ampuláridos en estos lugares. Ampullariidae comprende moluscos que habitan aguas dulces, lénticas, de distribución tropical y subtropical (gondwanica). Por esta coincidencia geográfica, sumado a los hallazgos moleculares, nosotros pensamos que los ampuláridos serían los reservorios, hasta ahora desconocidos, y vectores del agente etiológico de la rinosporidiosis. Aquí pretendimos iniciar los estudios morfológicos y morfométricos, de los posibles simbiontes de tres vectores ampuláridos, que nosotros hemos propuesto como posibles agentes etiológicos de la rinosporidiosis. OBJETIVOS La presencia de corpúsculos simbióticos en la glándula digestiva de tres especies de ampuláridos simpátricas (P. canaliculata, P. scalaris, y Asolene pulchella) en muestreos efectuados en el Lago Regatas (Buenos Aires, Argentina), un cuerpo de agua léntico de reducido tamaño nos permitieron plantearnos los siguientes objetivos: (1) aislar y comparar los corpúsculos simbióticos de las especies de ampuláridos estudiadas; (2) determinar caracteres morfométricos de corpúsculos simbióticos aislados en estas especies de modo de inferir si los endosimbiontes son especie-específicos (con transmisión vertical) o con transmisión horizontal, aprovechando las especiales consideraciones ecológicas del lago; (3) describir caracteres morfológicos de la glándula digestiva y la ocupación relativa glandular de los endosimbiontes intracelulares y sus huéspedes. MATERIALES Y METODOS Animales: ejemplares de Pomacea canaliculata, P. scalaris y Asolene pulchella, se obtuvieron en el Lago Regatas (Palermo, Buenos Aires). Estudios morfométricos de endosimbiontes aislados: Los corpúsculos pigmentados fueron obtenidos según el procedimiento desarrollado en Vega et al. 2005. Para las estimaciones de medias, se utilizó la herramienta ImageJ 1.47V (Wayne Rasband National Institutes of Health, USA). Estudios morfológicos glandulares: Porciones de glándula digestiva fueron fijadas in situ en paraformaldehído, deshidratadas e incluidas en Histoplast®, cortadas y luego teñidas con azul Alcian-Nuclear Fast Red®-eosina, tinción histológica que diferencia las formas simbióticas de las células del huésped. Se fotografiaron y se calcularon los porcentajes de ocupación simbiótica glandular y tipos celulares del huésped utilizando el software Image Pro Plus 6.0.0.260. Estadística: Para comparar las medias estimadas, se usó el test no paramétrico de Kruskal-Wallis con post test múltiple de Dunn (p P. canaliculata > P. scalaris. Por su parte, el diámetro menor cambia en forma decreciente y significativa en el siguiente orden: A. pulchella > P. scalaris > P. canaliculata. Es notable que, en todas las especies, el valor de ocupación relativa, tanto de células columnares (~55%) como de células piramidales (~40%) es igual en las tres especies huésped. El área restante, menor al 5%, corresponde a angostos espacios extracelulares y pequeños vasos hemolinfáticos, que provoca una pequeña subestimación de áreas. La ocupación relativa de los corpúsculos ?C? varía entre 13 y 11 %, siendo el patrón: A. pulchella > P. canaliculata > P. scalaris. En cuanto a la ocupación glandular de los corpúsculos ?K?, se observa un valor cercano a 11 %, de patrón muy homogéneo. Cuando comparamos estadísticamente la suma de ambas formas simbióticas, obtenemos valores de ocupación de entre 22 y 24%, con un patrón también homogéneo. CONCLUSIONES Dado que el tamaño y pigmentación de los endosimbiontes de las especies simpátricas son diferentes, la glándula digestiva de los hospedadores es muy similar y la ocupación simbiótica es semejante en las tres especies huésped que coexisten en un ambiente restringido, concluimos que el endosimbionte es específico de cada hospedador, y que el evento de asociación simbiótica ocurrió una sola vez en el ancestro común de los ampuláridos. Entonces, siguiendo nuestra hipótesis, podemos pensar puede haber más de un agente causal de la rinosporidiosis, y posiblemente el reservorio sea un caracol ampulárido.