IHEM   20887
INSTITUTO DE HISTOLOGIA Y EMBRIOLOGIA DE MENDOZA DR. MARIO H. BURGOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Análisis molecular de la reacción cortical en ovocitos de ratón
Autor/es:
MICHAUT, MARCELA A.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Jornada; Oocitos y espermatozoides: nuevas miradas en el estudio de la fecundación; 2013
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
En mamíferos, el mecanismo primario para prevenir la fecundación poliespérmicainvolucra la exocitosis de gránulos corticales, también conocida como reacción cortical. Varios estudios han sugerido que este proceso exocítico es una vía de señalización mediada por las proteínas SNAREs; sin embargo, la caracterización molecular de la exocitosis de gránulos corticales todavía es incompleta. Nosotros hipotetizamos que el ovocito utiliza la misma maquinaria conservada de fusión de membranas que las descriptas en neuronas y espermatozoides humanos. Asimismo, hipotetizamos que el complejo regulatorio SNAP/NSF está presente en ovocito de ratón y participa en la fusión de los gránulos corticales con la membrana plasmática durante la reacción cortical. Para ello, investigamos la expresión de las isoformas SNAP: α, β, y γ, y NSF por RT-PCR. Los resultados mostraron que sólo α- y γ-SNAP se expresan en ovocitos de ratón como así también NSF. El análisis por Western blot indicó que estas proteínas están presentes durante la maduración y la activación ovocitaria y no presentan variaciones entre los diferentes estadíos analizados. El estudio de la inmunolocalización demostró que α-SNAP y NSFlocalizaron principalmente en la región cortical de dichos estadíos. Si bien γ-SNAP tiene una distribución similar a la de α-SNAP, esta proteína también mostró una distribución citoplasmática tanto en ovocitos inmaduros como en estadíos postactivación. Todas las proteínas identificadas: α-SNAP, γ-SNAP, y NSF fueron predominantemente observadas en la región cortical, la cual está enriquecida en gránulos corticales en el estadío de ovocito maduro, sugiriendo que estas proteínas pueden estar involucradas en la exocitosis de gránulos corticales. Esto fue confirmado parcialmente, ya que la microinyección de un anticuerpo específico anti-α-SNAP inhibió significativamente la exocitosis de gránulos corticales en un ensayo funcional. No obstante, más estudios son necesarios para corroborar la participación de NSF y dilucidar si α-SNAP y γ-SNAP son igualmente importantes para la reacción cortical o tienen diferentes funciones en la fisiología del ovocito.