Nuevo método para evaluar el estado de activación de la proteína Rap en espermatozoides humanos

LUCCHESI O; RUETE MC; BUSTOS MA; QUEVEDO MF; TOMES CN

Mendoza

Jornada; XXIII Jornadas de Investigación y V de Posgrado de la UNCuyo; 2013

Universidad Nacional de Cuyo

La reacción acrosomal (RA) es un tipo de exocitosis regulada que lleva a la liberación del contenido del gránulo acrosomal, un evento clave en la fertilización. Las proteínas Rap son pequeñas proteínas G que ciclan entre un estado inactivo unido a GDP y un estado activo unido a GTP. En su estado activo interactúan con proteínas efectoras induciendo eventos de señalización corriente abajo. Durante la RA de espermatozoides humanos la activación de la vía AMPc-Epac-Rap1-PLC conduce a la movilización de calcio desde un reservorio intracelular, posiblemente el acrosoma. Nos propusimos desarrollar una nueva metodología que permita detectar la activación de la proteína Rap en respuesta a un estímulo de la RA. Con este fin, diseñamos un método basado en la técnica de inmunofluorescencia indirecta utilizando el cassette Ral-GDS-RDB que tiene la capacidad de unir Rap-GTP. En respuesta a los inductores de la RA A23187 y progesterona, detectamos un aumento en el número de células conteniendo Rap activa de alrededor del 40%. Este nuevo método resulta de utilidad para medir la activación de distintas proteínas G que participan en las cascadas de señalización involucradas en la exocitosis acrosomal.