DINÁMICA DE LA REACCIÓN CORTICAL EN TIEMPO REAL DE OVOCITOS DE RATÓN

CAPPA A., DE BLAS G., DE PAOLA M., MAYORGA L., MICHAUT M.

Congreso; LVIII REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2013

La fecundación de un ovocito desencadena la exocitosis de los gránulos corticales (GC), proceso conocido como reacción cortical (RC). Debido a la falta de un marcador específico de GC, no se ha podido estudiar la cinética de la RC. El objetivo de este trabajo fue estudiar la dinámica de la RC en tiempo real en ovoci- tos activados partenogenéticamente y comparar su cinética entre ovocitos ovulados (madurados in vivo) y madurados in vitro. Para observar la RC se utilizó la lectina Lens culinaris-FITC para teñir el contenido de los GC secretado al espacio perivitelino. Los ovocitos ovulados fueron obtenidos a partir de oviductos provenientes de hembras estimuladas hormonalmente con PMSG y hCG. Para la maduración in vitro, los ovocitos fueron colectados a partir de ovarios de hembras estimuladas con PMSG y madurados in vitro en medio CZB durante 15 hs. Los ovocitos fueron montados en una cámara conteniendo medio M2 libre de calcio y magnesio y activados partenogenéticamente con cloruro de estroncio en presencia de la lectina. Las imágenes fueron capturadas en un microscopio invertido acoplado con un sistema de iluminación LED y una cámara de alta resolución. Se tomaron imágenes cada 1 min durante 1 h. Los resultados preliminares muestran que el 82% de los ovocitos ovulados reaccionaron a los 10 min; por el contrario sólo el 50% de los ovocitos madurados in vitro reaccio- naron recién a partir de los 25 min. Además, observamos que la cinética de la RC transcurre de manera gradual y simultánea en los ovocitos ovulados, mientras que en los madurados in vitro lo hace de manera abrupta y asincrónica. En conclusión, la cinética de la RC en los ovocitos ovulados es sincrónica y similar en tiem- po a la fisiológica desencadenada por la fecundación, mientras que en los ovocitos madurados in vitro es asincrónica y tardía. Nuestros resultados muestran por primera vez la dinámica de la RC en tiempo real y revelan que las condiciones de maduración afectan la cinética de la misma.