El Virus de la Bursitis Infecciosa Aviar utiliza la vía macropinocítica para su internalización celular

LAURA RUTH DELGUI; MARÍA CECILIA GIMENEZ; JOSÉ F. RODRÍGUEZ; MARÍA ISABEL COLOMBO

Buenos Aires

Otro; XXXIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2013

Sociedad Argentina de Virología

El Virus de la Bursitis Infecciosa Aviar (IBDV) es un importante patógeno aviar integrante de la familia Birnaviridae, cuyo genoma está compuesto de ARN de doble cadena cubierto por una cápside proteica. Es el agente etiológico de una severa enfermedad inmunosupresora que produce una altísima mortalidad de las aves afectadas y graves pérdidas económicas en la industria avícola. Nuestro grupo de investigación está centrado en estudiar los aspectos celulares y moleculares de la interacción virus-célula, con especial énfasis en describir posibles nuevas formas de control de la patología aviar. En el presente trabajo, nuestro objetivo ha comprendido la caracterización de la vía de internalización viral. Así, hemos abordado el estudio de la endocitosis como posible mecanismo involucrado en la infección por IBDV. Para ello, hemos empleado los siguientes inhibidores específicos: dynasore (inhibidor de dinamina), clorpromacina (inhibidor de endocitosis mediada por clatrina), metil-β-ciclodextrina y filipina III (inhibidores de la endocitosis mediada por colesterol), citocalacina D y latrunculina B (inhibidores de la polimerización de actina), etilisopropilamiloride (inhibidor de macropinocitosis) y bafilomicina A1 (inhibidor de la acidificación intravesicular). Además, se empleó la sobreexpresión de proteínas mutantes: EGFP-DynK44A (mutante dominante negativa de dinamina), EGFP-Rab5S34N y EGFP-Rab7T22N (mutantes dominante negativas de Rab5 y Rab7, respectivamente). En todos los casos, el análisis de la internalización viral se realizó mediante la cuantificación de células infectadas por Microscopía confocal y la determinación de los niveles de proteína viral VP3 por la técnica de Western blot tras 12 horas de la infección con el virus. Hemos empleado, con fines comparativos, ligandos bien establecidos para cada una de las vías endocíticas analizadas: transferrina (endocitosis clatrina- y dinamina-dependiente), la subunidad B de la toxina colérica (vías colesterol- y caveolina-dependientes) y el dextrano (macropinocitosis). Además, con el fin de describir morfológicamente la entrada del virus, hemos realizado estudios ultraestructurales de la cinética de internalización viral. Nuestros estudios indican que la internalización de IBDV ocurre de una manera clatrina-, caveolina-, colesterol- y dinamina-independiente. En cambio, IBDV utiliza una vía endocítica con características macropinocíticas evidenciado por: el tamaño de vesícula que contiene los viriones internalizados, el requerimiento de la integridad del citoesqueleto de actina y la funcionalidad del intercambiador de Na+/H+ membranal. Luego de la internalización, las partículas virales transitan a través de endosomas tempranos marcados por Rab5, y requieren el pH bajo intravesicular, y una vía endocítica funcional para completar su ciclo de replicación. En conjunto, nuestros resultados indican fuertemente que IBDV utiliza la vía macropinocítica como el principal mecanismo de internalización celular.