Rol de los Microtúbulos de la Célula Hospedadora en la Biogénesis de la Vacuola Parasitófora donde Reside y se Multiplica Coxiella burnetii

ORTIZ FLORES, R; DISTEL, S; COLOMBO, M; AGUILERA, M; BERÓN, W

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología y II Congreso Microbiología Agrícola y Ambiental.; 2013

Coxiella burnetii (Cb) es un patógeno intracelular obligado, agente causante de la fiebre Q, que transita por la ruta fagocítica de la célula hospedadora, hasta alcanzar un compartimento con características autofagolisosomales, donde vive y se multiplica, llamado vacuola parasitófora (VP). El tráfico vesicular hacia el centro y la periferia celular es regulado por las proteínas motoras dineinas/dinactina, y kinesinas, respectivamente, que se desplazan sobre los microtúbulos (Mts). La GTPasa Rab7 dirige este tráfico ya sea formando complejo con RILP (Rab7-interacting lysosomalprotein)-dineína/dinactina o con FYCO-kinesinas. Existen pocas evidencias sobre la interrelación de patógenos intracelulares con Mts, sus proteínas motoras y Rab7. Nuestro objetivo es determinar el rol de los Mts, proteínas motoras y Rab7 en la formación de la VP donde reside Cb. Para tal fin, se transfectaron o cotrasfectaron células HeLa con los siguientes plásmidos: pEGFP-p150Glued o pEGFP-Dinamitina/p50 (proteínas motoras), pEGFP-RILP, EGFP-Rab7 y sus mutantes dominantes negativos, y por otro lado con los plásmidos pcDNAKIF5 (proteína motora), pGFP-FYCO y sus mutantes dominantes negativos. Las células se infectaron con Cb (?Clone 4 phase II NineMile?) por 16 h y luego se analizó la formación de las VP a las 48 h post-infección. Las células se procesaron para IFI, se analizaron por microscopía confocal y se determinaron los siguientes parámetros: cantidad de células infectadas, número y tamaño de las VPs, y grado de colocalización de las proteínas en estudio en las VPs. Los resultados obtenidos mostraron un reclutamiento de todas las proteínas cepa salvaje a la VP, sin afectar su tamaño, mientras que las proteínas motoras mutantes aumentaron o disminuyeron el tamaño normal de la VP. La proteína adaptadora RILP sobreexpresada se reclutó a la VP, tanto en células cotransfectadas con el constructo Rab7 cepa salvaje como con sus mutantes dominante negativa. La sobreexpresión de RILP mutante indujo mayor número de VPs pero de menor tamaño, indicando que se afectaría la fusión homo/heterotípica. De manera similar la sobreexpresión de p150Glued mutante o de dinamitina/p50 disminuyó el diámetro de la VP. Por otro lado, la sobreexpresión de la kinesina, KIF5, y de su adaptador, FYCO, disminuyó el diámetro de la VP sin afectar la cantidad de vacuolas. La sobreexpresión de las mutantes dominantes negativas de FYCO y de KIF5, no alteraron en mayor medida el desarrollo normal de la VP. En conjunto, estos resultados sugieren que la proteína motora dineína estaría involucrada en el transporte de fagosomas que contienen C. burnetii desde la periferia celular hacia la región perinuclear favoreciendo la biogénesis de la VP.