Diseño e Incorporación de la Proteína Permeable "Esponja de AMPc" en Espermatozoides Humanos.

LUCCHESI O; RUETE MC; BUSTOS MA; TOMES CN

Mendoza

Jornada; Reunión conjunta del III Foro Provincial de Investigación para la Salud del Ministerio de Salud de la Provincia de Mendoza, las XII Jornadas de Investigación de la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Nacional de Cuyo y las I Jornadas de Investi; 2012

Ministerio de Salud de la Provincia de Mendoza y Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Nacional de Cuyo

La mayoría de las células en nuestro organismo liberan proteínas y otras sustancias utilizando un proceso denominado exocitosis. La reacción acrosomal (RA) es una exocitosis regulada donde la membrana del acrosoma (gránulo secretorio propio del espermatozoide) se fusiona con la membrana plasmática de la porción anterior de la cabeza. Este proceso libera enzimas hidrolíticas almacenadas en el acrosoma las cuales permiten penetrar en la zona pelúcida del ovocito (1). Esta exocitosis involucra la misma maquinaria proteica conservada y componentes regulatorios caracterizados en otros eventos secretorios (2[p1] ). El AMPc es una molécula con un rol central en la regulación de la exocitosis. En espermatozoides, varias vías de activación requeridas para adquirir la habilidad de fertilizar al ovocito dependen de un incremento del AMPc intracelular. La proteína quinasa dependiente de AMPc (PKA) es el efector primario de la señal de AMPc. En espermatozoides ha sido implicada en procesos de motilidad, capacitación y RA a través de vías de señalización aún no bien establecidas que culminan con un incremento en la fosforilación de tirosinas (3,4).Estructuralmente, esta enzima consta de dos subunidades catalíticas (PKA-C) unidas no covalentemente a un dímero de subunidades regulatorias (PKA-R). Existen dos clases de subunidades regulatorias, la subunidad RI tiene una alta afinidad por AMPc, sus primeros 100 aminoácidos contienen los dominios biológicamente activos responsables de la homodimerización y unión a las subunidades PKA-C; mientras que los dos dominios de unión a AMPc están ubicados en los extremos C-terminal (5). Como el espermatozoide es una célula transcripcionalmente y traduccionalmente inactiva (6), es imposible evaluar la función o el efecto de una proteína mediante su sobreexpresión o silenciamiento. La incorporación de proteínas recombinantes permeables que contienen péptidos ricos en arginina en espermatozoides intactos, permite evaluar la función de la proteína en condiciones fisiológicas (7).