IHEM   20887
INSTITUTO DE HISTOLOGIA Y EMBRIOLOGIA DE MENDOZA DR. MARIO H. BURGOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Expresión de Proteínas Fluorescentes en Ovocito de Ratón
Autor/es:
CAPPA, ANDREA ISABEL; DE PAOLA, MARIA MATILDE; GALLO, GIOVANNA LUCRECIA; MICHAUT, MARCELA ALEJANDRA
Lugar:
MENDOZA
Reunión:
Jornada; REUNION CONJUNTA III FORO PROVINCIAL PARA LA SALUD-MINISTERIO DE SALUD; XII JORNADAS DE INVESTIGACIÓN DE LA FACULTAD DE CIENCIAS MEDICA UNCUYO; I JORNADA DE INVESTIGACIÓN DEL HOSPITAL UNIVERSITARIO UNCUYO; 2012
Resumen:
Una de las características que distingue a los ovocitos y los diferencia de los demás tipos celulares es la detención de su ciclo celular o ‘arresto meiótico’. La división meiótica, en mamíferos, es detenida dos veces: en profase de la primera división meiótica (profase I) y en metafase de la segunda división (metafase II).Al alcanzar su tamaño máximo, en profase I, el ovocito se vuelve transcripcionalmente inactivo. La transcripción es reanudada nuevamente luego de la fecundación, cuando el embrión ya posee sus primeras células.Hasta ese momento, la traducción se produce sólo a partir del reservorio de ARN mensajeros (ARNm) de origen materno conocidos como ARNm durmientes. Es por ello que, en ovocitos de mamíferos,la sobreexpresión de proteínas sólo es posible mediante la microinyección de ARN mensajeros exógenos. Para que las proteínas codificadas por dichos ARNm puedan detectarse, deben tener una marca que permita visualizarlas y que, al mismo tiempo, no interfiera en la función de las proteínas marcadas. La proteína fluorescente verde (EGFP) es una buena opción para este propósito y, al estar unida a una proteína de interés, permite analizar la función de la misma tanto en experimentos en células fijadas como en experimentos in vivo. En una primera etapa, el objetivo general de este trabajo fue sobreexpresar proteínas fluorescentes en ovocitos de ratón.Para esto, se eligió como control a la proteína EGFP y como proteína de interés a Rab3A, una proteína que participa en la fusión de membranas durante la exocitosis. Por lo tanto, los objetivos específicos de este trabajo fueron: (1)producir el ARNm de las proteínas fluorescentes EGFP y EGFP-Rab3A por transcripción in vitro, y (2) microinyectar los ARNm obtenidos para sobreexpresar dichas proteínas en ovocitos de ratón.