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INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS: Pomacea canaliculata es el único caracol dulceacuícola incluido por la IUCN entre los 100 peores agentes invasores del mundo. Constituye un problema sanitario por ser huésped intermediario del agente etiológico de la encefalitis eosinofílica. Por ocupar el centro y norte de nuestro país, se realizan desde hace tiempo estudios de los mecanismos ecofisiológicos de invasividad de esta especie, en busca de formas de controlarla. Es así que se han puesto a prueba diferentes molusquicidas con diferentes efectos, tanto en la sobrevida del animal, como en la reproducción del mismo, actuando algunos como disruptores endócrinos. Como ejemplo de esto, los compuestos organometálicos, como el tributilestaño (TBT), inducen ?imposex? con la formación de un pene o vaso deferente en hembras. En estudios anteriores de nuestro laboratorio hemos observado la aparición de este fenómeno tras la exposición a dosis subletales de TBT en hembras adultas, pero nada se conoce del efecto de este disruptor en bajas dosis y si es capaz de producir alguna alteración durante la organogénesis reproductiva del animal. Por lo expuesto anteriormente proponemos como objetivo de este trabajo evaluar el efecto del TBT en bajas dosis, administradas vía intramuscular, durante etapas tempranas del desarrollo y comparar los resultados con animales adultos donde se ha comprobado este efecto. MÉTODOS Animales: Los ejemplares de P. canaliculata se obtuvieron de una cepa de cultivo originaria del Lago del Rosedal (Ciudad de Buenos Aires). Fueron mantenidos en condiciones de temperatura (25°C) y fotoperíodo (14/10 luz-oscuridad) controlados y alimentados con una dieta compuesta de lechuga y pellets de alimento para peces. Se realizaron 3 cambios de agua semanales. Exposición de animales a tributilestaño (TBT): Se seleccionaron aleatoriamente animales juveniles (10mm) y adultos sexualmente activos (hembras de 4 meses de edad). La cantidad de animales juveniles con los que se trabajó fue mayor que la de adultos por la imposibilidad de reconocer externamente su sexo. Grupos 1 y 2 ? Juveniles CONTROL 15 y 20mm: Se trabajó con 67 animales de 10mm de tamaño que fueron inyectados en el músculo del pie con 2μl de la solución vehículo (alcohol 70% en buffer POMACEA - 86 mmol/LNaCl, 1.8mmol/L KCl, 2.1mmol/L CaCl2, 10mmol/L HEPES, pH 7.6). Treinta y siete animales fueron sacrificados cuando alcanzaron los 15mm de tamaño y los restantes al alcanzar los 20mm. Grupo 3 y 4 ? Juveniles TBT 15 y 20mm: Se trabajó con 74 animales de 10mm de tamaño que fueron inyectados en el músculo del pie con 2μl de TBT 1μg/gr de peso, disuelto en solución vehículo. Cuarenta y cinco animales fueron sacrificados a los 15mm de tamaño y los restantes a los 20mm. Grupos 5 y 6 ? Adultos CONTROL 15 y 30 días: Se inyectaron 24 hembras adultas en el músculo del pie con 2μl de la solución vehículo. Trece fueron sacrificadas cumplidos los 15 días post-inyección y las restantes al cumplir los 30 días post-inyección. Grupo 7 y 8 ? Adultos TBT 15 y 30 días: Se inyectaron 21 hembras adultas en el músculo del pie con 2μl de TBT 1μg/gr de peso, en solución vehículo. Diez animales fueron sacrificadas cumplidos los 15 días post-inyección y las restantes al cumplir los 30 días post-inyección. En los casos estudiados se determinó el desarrollo del aparato copulatorio a través de su observación bajo lupa estereoscópica y disección. Posteriormente se estadificó el desarrollo del mismo según los criterios descriptos en las figs.1-2. Además, se realizó un análisis histológico gonadal (microscopía óptica-Hematoxilina/eosina), a fin de constatar la normalidad estructural del ovario. El análisis estadístico se realizó mediante la prueba de diferencia de proporciones utilizando el software estadístico Infostat ver2010. RESULTADOS Desarrollo del aparato copulatorio: JUVENILES - El total (14/14) de hembras del grupo 3 (15mm-TBT) mostraron un desarrollo del aparato copulatorio correspondiente a estadío 1B. En contraste, solo 3 de 17 hembras del grupo 1 (control) alcanzaron el mismo grado de desarrollo (P<0,05), distribuyéndose el resto de este grupo en estadios 0 y 1a (Fig.1-2). - Cuando comparamos los animales de 20mm, la diferencia también fue significativa (P<0,05), lográndose estadíos 1B y superiores en 10 de las 18 hembras tratadas con TBT (grupo 4), en comparación con sólo 2 de las 13 hembras inyectadas con solución vehículo (grupo 2) (Fig.1-2). ADULTOS: - En animales adultos el grupo 7 alcanzó en su totalidad (10/10) aparatos copulatorios correspondientes a E2 y superiores (5 hembras E2, 5 hembras E3); mientras que 1/ 13 hembras del grupo 5 (control) logró ese desarrollo (P<0,05) (Fig.1-2). - El total (11/11) hembras el grupo 8 (tratadas con TBT) presentaron estadíos E2 y superiores (3 casos E2, 8 hembras E3), mientras que en las del grupo 6 (control), no observamos ningún caso que haya superado el estadio 1 (0/11) (P<0,05) (Fig.1-2). Análisis histológico de la gónada: - En el grupo de juveniles sacrificados al alcanzar 15mm de tamaño (grupo control y TBT) se observaron cordones celulares con luz reducida en tamaño, y células germinales pequeñas y medianas (fig. 3, Ay B), resultados esperados para esta etapa de desarrollo. - Las hembras sacrificadas al alcanzar los 20 mm mostraron mayor dilatación luminal de los cordones, y la presencia de algunos ovocitos maduros (fig. 3, C y D). - En las hembras adultas (sacrificadas 15 y 30 días post-tratamiento control y TBT) se observó el desarrollo gonadal normal con cordones celulares dilatados y presencia de numerosos ovocitos (fig. 3, E y F). CONCLUSIONES Mediante este trabajo hemos podido observar que el TBT en bajas dosis es capaz de inducir imposex tanto en animales adultos como en juveniles. Asimismo, no hemos evidenciado alteraciones gonadales y por tanto inferimos que no habrían efectos a nivel reproductivo tomando como órgano blanco la gónada de P. canaliculata. En estudios previos hemos observado que en la organogénesis reproductiva de este molusco podrían actuar dos androtrofinas (Fig.4), las cuales participarían en el desarrollo (androtrofina A) y en el crecimiento (androtrofina B) de las estructuras del aparato copulatorio. Nuevos estudios podrán aclarar cuáles son estas androtrofinas y cuándo actúan en uno y otro sexo.