Relación entre Coxiella burnetii y las GTPasas de la Familia Rho de la Célula Hospedadora durante la infección.

SALINAS, RP; AGUILERA, MO; CARMINATI, S ; BERÓN, W; ROSALES, E

Mendoza

Jornada; Jornadas virtuales de la Facultad de Ciencias; 2012

SeCTyP-FCM, UNCU

Introducción La fagocitosis es un mecanismo de defensa importante del hospedador contra microorganismos patógenos. En este proceso, el citoesqueleto de actina y GTPasas de la familia Rho de la célula hospedadora desempeñan papeles importantes. Coxiella burnetii (Cb) es un patógeno intracelular que entra en las células hospedadora mediante un mecanismo poco caracterizado. Tenemos evidencias que las GTPasas de la familia Rho están involucradas en la interacción Cb-células hospedador. Métodos Células Hela se infectaron por 4h a 37ºC en estufa con tensión de CO2 (5%). Luego se fijaron y procesaron adecuadamente para Inmunofluorescencia Indirecta. Las células se analizaron por microscopía confocal y se determinó el número de Cb internalizadas. En experimentos con inhibidores, las células se incubaron con el inhibidor a lo largo de la infección. En experimentos de sobreexpresión de proteínas, células HeLa se transfectaron con los plásmidos: pEGFP-RhoA, -Rac1 o Cdc42 en sus formas salvajes (WT) y mutantes dominantes negativas RhoA N19, Cdc42 N17, Rac1 N17; pEGFPmDia1-N1 (dominio de interacción de RhoA), pEGFPmDia1-FL (proteínas completa) o pEGFPmDia1-ΔN3 (dominio de polimerización de actina) previo a la infección con Cb. Resultados En este trabajo se investigó el papel de RhoA, Rac1 y Cdc42 en el proceso de internalización Cb. Para tal fin, células HeLa fueron tratados con la toxina B, un inhibidor de la Rho GTPasas, previo y durante la infección. Observamos que la toxina B disminuyo significativamente la internalización de Cb (Figura 1). Se observó un efecto similar en células HeLa que sobreexpresaban las mutantes dominantes negativos de la GTPasas Rho, RhoA N1 y Rac1N17 (Figura 2). Estos resultados sugieren que estas GTPasas son importantes para la internalización Cb. Como la sobreexpresión de la dominante negativa de RhoA causó el efecto inhibitorio más potente, decidimos examinar la participación de los efectores RhoA, ROCK y mDia1, en la entrada Cb a células HeLa. Mediante el uso de Y27632, un inhibidor de ROCK, se observó que células tratadas mostraron una disminución significativa en la internalización de Cb (Figura 3). Este resultado sugiere que ROCK estaría involucrada en el proceso de internalización. Por otro lado, las células transfectadas con pEGFP que codifican la mutante negativa mDia1-N1(interacción de RhoA) mostraron menor nivel de internalización respecto al observado en células transfectadas con pEGFPmDia1-FL o -ΔN3 (Figura 4). Estos resultados sugieren que el efector de la RhoA, ROCK participar en la internalización de Cb. Conclusiones - Las GTPasas de la familia Rho están involucradas en la internalización de Coxiella burnetii - La vía de señalización RhoA/ROCK-mDia1 es parte de la maquinaria molecular de la célula hospedadora que participa en la internalización de Coxiella burnetii.