Expresión de proteínas SNAPs en ovocito de ratón

DE PAOLA MARIA MATILDE; GALLO GIOVANNA LUCRECIA; MAYORGA LUIS SEGUNDO; MICHAUT MARCELA ALEJANDRA

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; LVI Reunión Científica Anual SAIC, Reunión Científica Anual 2011 SAFIS, II Congreso Nacional y IV Reunión Científica Regional por el Bienestar del Animal de Laboratorio y el Progreso de la Ciencia AACYTAL; 2011

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La exocitosis de los gránulos corticales (EGC) constituye el bloqueo primario de la poliespermia. El mecanismo molecular de este proceso no ha sido dilucidado hasta el momento, y sólo se conocen 4 proteínas asociadas al mismo: Rab3A, sintaxina 4, Rabfilina 3 y SNAP-25. Muchas de las familias de proteínas involucradas en fusión vesicular presentan un alto grado de conservación de levaduras a mamíferos, hecho que puede ser interpretado como un indicativo de que la mayoría, sino todos los procesos de fusión de membranas usan la misma maquinaria molecular. Teniendo en cuenta esta premisa, formulamos como hipótesis de trabajo la presencia de las proteínas SNAPs en el ovocito de ratón. Las SNAPs son una familia de proteínas que desempeñan un rol clave en la fusión de membranas. En mamíferos se han descripto tres isoformas α, β y ɣ. En ratones hyh, cepa que presenta una mutación puntual en el gen de α SNAP (M105I), se ha verificado que, además de exhibir problemas neurológicos, son estériles. La infertilidad de los machos es debida a que la proteína α SNAP mutada altera la exocitosis acrosomal. Sin embargo, se desconoce la causa de la infertilidad de las hembras hyh y, aún más, se desconoce si SNAP está presente en el ovocito. Con el objetivo de identificar la/s isoforma/s de SNAP presente/s en el ovocito de ratón se realizó RT-PCR. El estudio de la localización subcelular y el análisis de la expresión durante la maduración fueron realizados mediante IFI y WB, utilizando un anticuerpo que reconoce conjuntamente las isoformas α/β. Los resultados muestran que α y ɣ SNAP están presentes en ovocitos de ratón, validando nuestra hipótesis de trabajo. Además, la isoforma α se localiza en la región cortical rica en GC, no presentando diferencias significativas en los niveles de expresión en los distintos estadíos celulares analizados. La localización de α SNAP en la región cortical sugiere que dicha proteína podría estar asociada a los GC, y posiblemente a la EGC.