Digestión extracelular de proteínas a lo largo del intestino de Pomacea canaliculata

GODOY MS, VEGA IA

San Juan

Congreso; Segunda Reunión Conjunta de las Sociedades de Biología de la República Argentina; 2011

Los objetivos de este trabajo pertenecen a un programa que trata de la biología de un endosimbionte putativo que habita las células epiteliales de la glándula digestiva de Pomacea canaliculata; estos son: (1) evaluar la actividad específica de proteasas solubles y leu-N-aminopeptidasas a lo largo del tubo digestivo; (2) estimar los pesos moleculares de las proteasas solubles; (3) caracterizar la actividad proteasa con inhibidores específicos de grupo; y (4) determinar la temperatura y pH óptimos de la actividad proteasa. Los caracoles fueron ayunados 24 hs y posteriormente alimentados durante 1,5 horas antes de ser sacrificados. Se extrajeron los contenidos del buche, estómago e intestino grueso, y se disecó la glándula digestiva. Los tejidos que conforman el tubo digestivo fueron lavados de los contenidos para el análisis de leu-N-aminopeptidasas. La actividad de las proteasa solubles se midió según Tomarelli (1947) y los pesos moleculares se estimaron por zimografía en gel; y la actividad leu-N-aminopeptidasa se midió según Maroux (1973). La actividad proteasa específica (mUI/mg proteínas) varió a lo largo del intestino siendo significativamente mayor en el intestino grueso respecto de los contenidos del buche y gástrico (ANOVA, p < 0,05). La zimografía indica pesos moleculares aparentes de 32 y 130 kDa para proteasas del contenido del buche y gástrico y 32, 150 y 200 kDa para las del intestino grueso. Entre los inhibidores estudiados (aprotinina, serín-proteasas; E64, cisteín-proteasas; pepstatina, aspártico-proteasas y EDTA, metaloproteasas), solo aprotinina inhibió el 60% de la actividad proteasa específica en los contenidos del buche y gástrico. Además aprotinina fue activa en la zimografía inhibiendo las proteasas de 32, 130 y 150 kDa. La temperatura óptima de la actividad proteasa varió entre los 30 y 35ºC, y el pH óptimo fue de 8,5 en el contenido gástrico, y 9,5 en los contenidos del buche e intestino grueso. La actividad N-aminopeptidasa se incrementó en dirección aboral y la glándula digestiva presentó la mayor actividad específica (ANOVA, p < 0,05). Nosotros concluimos que el intestino de Pomacea canaliculata es plausible la digestión extracelular de proteínas, por medio de proteasas solubles y asociadas a la membrana (leu-N-aminopeptidasas).