Manipulación génica en la glándula pineal de rata: inyección intraventricular y electroporación in utero.

M. FITT; A. CASTRO; S. BENITEZ; J. RASMUSSEN; D. GALIANA; E. MUÑOZ

San Juan

Congreso; Segunda Reunión Conjunta de Sociedades de Biología de la República Argentina-IIRCSB; 2011

Sociedades de Biología de la República Argentina

MANIPULACION GENICA EN LA GLANDULA PINEAL DE RATA: INYECCION INTRAVENTRICULAR Y ELECTROPORACION IN UTERO Est. Marcos René FITT - REF. (1)Lic. Analía Elizabeth CASTRO - REF. (1)Lic. Sergio BENITEZ - REF. (1)Est. Jorge RASMUSSEN - REF. (1)Est. Daniela GALIANA - REF. (1)Dra. Estela Maris MUÑOZ - REF. (1)1 - Laboratorio de Neurobiología: Sección de Cronobiología, Instituto de Histología y Embriología (IHEM), Facultad de Ciencias Médicas (FCM), Universidad Nacional de Cuyo (UNCuyo)2 - Concejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET)3 - Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica (ANPCyT)La dilucidación del genoma en un gran número de especies constituye un avance importante de la ciencia contemporánea. Un desafío mayor es comprender el rol de los productos codificados por dicho genoma, tanto en la fisiología general como en la ontogenia de diferentes órganos. Nuestro objetivo a largo plazo es contribuir a dilucidar las bases moleculares que modulan el establecimiento y mantenimiento de ritmos circadianos. El sistema circadiano es complejo, tanto en su constitución como función, pero esencial al permitir a los organismos adaptarse a señales ambientales y facilitar su supervivencia. La glándula pineal es uno de los efectores de dicho sistema y nuestra hipótesis es que factores de transcripción como el NeuroD1 que se expresan en estadios tempranos del desarrollo de la glándula perdurarían postnatalmente manteniendo el fenotipo glandular. Con el fin de manipular genes sólo a nivel del área donde se localiza la glándula, optimizamos la técnica de inyección intraventricular de vectores en embriones de rata y posterior electroporación para direccionar dichos plásmidos específicamente al área pineal. El uso de vectores portadores de genes reporteros y promotores promiscuos nos permitió abordar a la glándula pineal, siendo el número de células positivas altamente dependiente del momento de la aplicación y la velocidad mitótica glandular, entre otros factores. Es de destacar que a la libertad espacial que esta técnica ofrece, se le suma la temporal; permitiendo sobreexpresar o inhibir a un gen en particular en cualquier momento del desarrollo, con una buena sobrevida de los embriones. Esta es una ventaja sobre los modelos de ratones knock-out (KO) que se han venido usando para el NeuroD1. Los ratones KO totales no sobreviven más allá de la primera semana de gestación, mientras los condicionales del tipo Cre-LoxP no expresan NeuroD1 en retina y pineal. En este último, los efectos de la falta del NeuroD1 específicamente en la glándula pineal estarían parcialmente enmascarados por su dependencia fisiológica con la retina. A estas desventajas debemos agregarle el costo y la infraestructura que representa importar y mantener líneas de animales transgénicos.  Neuroquímica / Neurociencias [NQ] | PosterSBCuyo