BUSQUEDA DE INHIBIDORES EN VESICULA SEMINAL Y PROSTATA QUE REGULEN LAS SERIN PROTEASAS ESPERMATICAS

MARISA CLEMENTI; PAOLA VANINA BOARELLI; MIGUEL WALTER FORNES; ANDREINA CESARI

Santiago de Chile

Congreso; IX CONGRESO INTERNACIONAL Y SIMPOSIO SATELITE; 2010

SAGACH

La regulación de la actividad de las serin proteasas en espermatozoides se ha atribuido a inhibidores presentes en el plasma seminal (PS), que podrían estar participando durante la capacitación. El PS está compuesto principalmente por secreciones de la vesícula seminal (VS) y la próstata (P). El propósito de este trabajo fue encontrar e identificar inhibidores de serin proteasas en VS y P de murino. Nosotros obtuvimos extractos de proteínas provenientes de la VS y la P de ratones CF1. Moléculas pequeñas fueron seleccionadas a través de membranas de filtración (30 – 3 kDa). La actividad total de estas fracciones  (VS y P) fue cuantificada a través de la capacidad de reducir la actividad de proteasas endógenas de espermatozoides capacitados, mostrando ambas actividad inhibitoria de un 63% y un 84%, respectivamente. Proteínas con actividad inhibitoria fueron detectadas por zimografía reversa. A través de espectrometría de masa (MS) se identificó el precursor de SV-IV en VS. Sin embargo la actividad inhibitoria de esta proteína no ha sido demostrada, se cree que está involucrada en cluster de genes que contienen motivos WFDC, presentes en algunos inhibidores de serin proteasas. Una fracción enriquecida en inhibidores fue obtenida a través de cromatografía de afinidad para tripsina agarosa en VS. La MS de la fracción retenida identificó SPINK3. En conclusión, obtuvimos una fracción proteica de bajo peso molecular proveniente de la VS que contiene posibles inhibidores se serin proteasas capaces de inhibir ambas proteasas espermáticas endógenas y tripsina. Sin embargo, todavía no se conoce cuál es la proteasa blanco sobre la cual actúan.