“LA FOSFORILACIÓN DE MARCKS: UN NUEVO COMPONENTE EN LA VÍA DE SEÑALES DURANTE LA EXOCITOSIS ACROSOMAL”

RODRIGUEZ PEÑA M.; CASTILLO J.; MAYORGA L.S.; MICHAUT M.A.

La Serena

Congreso; XXI Reunión Anual Sociedad Chilena de Reproducción y Desarrollo.; 2010

Sociedad Chilena de Reproducción y Desarrollo.

El acrosoma es un gran granulo secretorio presente en la parte apical de la cabeza del espermatozoide humano. La exocitosis de este granulo es un paso esencial durante la fecundación. Durante la exocitosis acrosomal (EA) la activación de PKC es fundamental, sin embargo se desconoce sus “target”. La proteína MARCKS es el principal sustrato de PKC en distintos tipos celulares y su actividad es fundamental en los procesos exocíticos. Previamente demostramos que MARCKS se encuentra presente en espermatozoides humanos y que se localiza en la región acrosomal. Nosotros proponemos que el estado de fosforilación de la proteína regula su participación durante la misma. Por Western Blot y haciendo uso de un anticuerpo que reconoce la forma fosforilada de MARCKS demostramos que esta se encuentra fosforilada en espermatozoides no capacitados y que durante el proceso de capacitación espermática es desfosforilada. Además observamos que MARCKS es fosforilada cuando se estimula la EA con PMA -un inductor de este proceso-. Para poder determinar la función de MARCKS y su estado de fosforilación durante en la EA, se purificó el Dominio Efector de MARCKS (ED) y dos mutante de este dominio, un dominio mutante el cual no es fosforilable (ED4A) y uno fosfomimético (ED4D), cuyo efecto se evaluó en espermatozoides permeabilizados con estreptolisina-O. Solamente los dominios ED y ED4A inhibieron la EA estimulada por calcio y PMA. Estos resultados demuestran que el estado de fosforilación regula la participación de MARCKS en la vía de transducción de señales durante la exocitosis acrosomal.