Compuestos polifenólicos de origen natural como potenciales nuevos antitumorales para el tratamiento del hepatocarcinoma

MARTÍNEZ MJ; ANDREU AB; BARBINI L

Buenos Aires

Congreso; XVIII Congreso Argentino de Hepatología; 2015

Asociación Argentina para el Estudio de Enfermedades del Higado

INTRODUCCIÓN: El hepatocarcinoma es uno de los tipos de cáncer más frecuentes mundialmente, diagnosticándose alrededor de 500000 nuevos casos al año. Si bien existen tratamientos disponibles, la tasa de mortalidad asociada a la enfermedad continúa siendo alta. Por esta razón, resulta imprescindible el desarrollo de nuevos compuestos antitumorales. Los polifenoles son metabolitos secundarios de plantas y el interés está dado por su potencial uso como antitumorales. HIPÓTESIS: Los extractos polifenólicos de papas andinas tienen la capacidad de inducir la muerte de hepatocitos tumorales humanos. OBJETIVO: Caracterizar el mecanismo de muerte activado por extractos polifenólicos de papas andinas en hepatocitos tumorales humanos ?in vitro?. MATERIALES Y MÉTODOS: Se utilizaron 3 líneas celulares de hepatocarcinoma humano: HepG2, Hep3B y Huh-7. Los compuestos polifenólicos se extrajeron (extracción metanólica) de la pulpa de la variedad CL658 de Solanum tuberosum (papa andina). Las células fueron tratadas con diferentes concentraciones de los extractos (25-400 ug/mL) por 24 hs. La viabilidad celular se analizó mediante el ensayo de MTS y tinción con azul tripán (AT). La inducción de muerte celular por apoptosis fue estudiada por medio de la tinción con bromuro de etidio y naranja de acridina (BE/NA). Se analizó la aparición de cambios morfológicos típicos de los mecanismos de apoptosis y/o autofagia por microscopía de contraste de fases y microscopía electrónica de transmisión. Se midieron los niveles de expresión de las proteínas regulatorias de la apoptosis de la familia de Bcl-2 por Western Blot.RESULTADOS: Los extractos polifenólicos resultaron citotóxicos para las 3 líneas celulares de hepatocitos tumorales ?in vitro?. Se determinó la concentración citotóxica 50 % (CC50, por MTS), resultando: 106,81 ug/mL en HepG2, 71 ug/mL en Hep3B y 132 ug/mL en Huh-7. Se observó un aumento significativo en el porcentaje de células muertas, como consecuencia de los tratamientos, mediante el recuento de las mismas teñidas con AT. La tinción con BE/NA mostró un aumento significativo de células apoptóticas tempranas en las 3 líneas celulares y también de células apoptóticas tardías en las HepG2. Las observaciones microscópicas demostraron que el tratamiento de los hepatocitos resultó en la aparición de estructuras típicas, tanto de la muerte por apoptosis (núcleos picnóticos y periféricos, reducción del tamaño celular y blebbing) como de la autofagia (vesículas doble membrana). Además, se obtuvieron diferencias significativas en los niveles de expresión de las proteínas regulatorias de la familia de Bcl-2, presentando las 3 líneas celulares distintas tendencias. CONCLUSIONES: La actividad citotóxica de los extractos polifenólicos de papas andinas sobre hepatocitos tumorales humanos está dada por la activación de la apoptosis y la autofagia. Estos resultados justifican ampliar su estudio como potenciales nuevos antitumorales para el tratamiento del hepatocarcinoma.