Detección de quorum sensing y su posible rol en la virulencia de Paenibacillus larvae

PELLEGRINI CELESTE; CUGNATA NOELIA; ZALAZAR LUCÍA; MARCANGELI JORGE; FUSELLI SANDRA; PONCE ALEJANDRA

Mar del Plata

Encuentro; IX Biólogos en red; 2014

Asociación de Jóvenes Investigadores en Formación (AJIF)

Paenibacillus larvae (PL) es el agente causal de Loque Americana, una severa enfermedad que afecta a las larvas de Apis mellifera. Las bacterias se comunican cuando hay una alta densidad celular por un mecanismo de quorum sensing (QS). PL produce en la etapa estacionaria de su crecimiento exoproteasas que podrían estar involucradas en el proceso de degradación de los tejidos larvales e inducidas por QS. En este trabajo se pretende estudiar la posible capacidad QS de PL. De un cultivo de PL crecido en caldo J a 37ºC (con shaker a 150rpm) por 65hs (f ase estacionaria) (DO600=2.0) se obtuvo ?medio condicionado? (MC): el cultivo fue centrifugado y el sobrenadante fue ultrafiltrado (YM 30, Amicon) para eliminar las proteasas presentes en el medio. Un cultivo de baja densidad celular (DO600=0.1) de PL fue centrifugado y las células fueron resuspendidas en medio de cultivo J fresco (control) y en MC (9:1) con iguales volúmenes finales. Ambos cultivos fueron incubados a 37ºC con agitación. Se tomaron alícuotas a diferentes tiempos para analizar DO600, actividad proteasa (en placas de agar leche) y cuantificar proteínas totales por Bradford. El cultivo que contenía MC mostró un crecimiento bacteriano superior al control y en una etapa de crecimiento mucho más adelantada. Además, fue detectada actividad proteasa en la fase exponencial mientras que en el control se detectó en la fase estacionaria. La cuantificación de proteínas totales también demostró la liberación diferencial de proteínas, que fue mayor en el cultivo con MC que en el control (60%). La producción/activación de las exoproteasas podría estar regulada por factores presentes en la fase estacionaria que actuarían como moléculas señal.