DETECCIÓN DE LA INFECCIÓN POR VERTICILLIUM DAHLIAE EN GIRASOL MEDIANTE PCR

CORTI MONZÓN GEORGINA; DE LA CANAL LAURA

Congreso; XII Congreso Argentino de Micología, XXII Jornadas Argentinas de Micología; 2011

El marchitamiento (o verticilosis) producido por el hongo Verticillium dahliae, es una enfermedad vascular que genera grandes pérdidas anuales en cultivos de girasol de Argentina. El hongo penetra por las raíces de las plantas, se dirige hacia los tejidos conductores y a través de ellos se esparce hacia la parte aérea. Los síntomas comienzan a observarse en las hojas a tiempos largos de infección (cuando hay una importante colonización fúngica) y culminan con el marchitamiento de la planta generado principalmente por oclusión de los tejidos vasculares. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) permite detectar secuencias específicas de ADN y ha sido empleada para la detección precoz de varios hongos fitopatógenos en etapas tempranas de infección. El método se basa en una extracción de ADN total de una planta infectada y amplificación de una secuencia específica del hongo mediante el empleo de cebadores específicos. El objetivo de este trabajo fue evaluar la utilidad de la técnica de PCR para la detección de V. dahliae en plantas de girasol a tiempos cortos post-inoculación cuando las plantas aún no muestran síntomas de infección. Para ello se inocularon plántulas con 1x107 conidios/ml durante 16hs y luego se colocaron a crecer en hidroponía en solución Hoagland. A distintos tiempos post inoculación se tomaron muestras de raíces y hojas, se extrajo el ADN mediante el método CTAB y se procedió a realizar reacciones de PCR usando los cebadores descriptos por Nazar y col. (1991), los cuales amplifican una secuencia específica presente entre los espaciadores transcripcionales internos ITS1 e ITS2 de los genes ribosomales del hongo. Como control de la calidad de las muestras se amplificó un gen de actina de girasol. Así, en una serie de ensayos preliminares se detectó V. dahliae en raíces a partir de los 10 días post inoculación (dpi), mientras que en hojas el hongo fue detectado a partir de los 14 dpi. Dado que en nuestro sistema de crecimiento las plantas muestran síntomas claros de la infección a aproximadamente los 25 dpi, usando la técnica de PCR fuimos capaces de detectar V. dahliae en tejidos de girasol antes de la aparición de síntomas. La detección más temprana en las raíces en comparación con las hojas es coherente con el modo de infección-colonización del hongo. Este ensayo es una herramienta rápida, precisa y muy sensible que podría ser usada para la detección de la presencia del hongo en los tejidos de girasol a tiempos cortos de infección. Se continuarán ajustando las condiciones experimentales para la detección cuantitativa y aún más precoz del hongo.