Aislamiento y caracterización de bacteriófagos activos contra Escherichia coli O157:H7

OLAYA PASSARELL, M.J.; ARISTIMUÑO, C.; HEBERT, E.M.; BRABBAN, A.; KUTTER, E.; RAYA, R.R.

Rosario, Argentina

Congreso; XII Jornadas Argentinas de Microbiología; 2008

Asociación Argentina de Microbiología

Escherichia coli O157:H7, una de las bacterias patógenas más virulentas que se conocen actualmente, puede resistir condiciones extremadamente ácidas por largos períodos de tiempo. Cuatro sistemas; entre ellos los sistemas dependientes de glutamato y arginina, contribuyen a la resistencia a los ácidos de estas células. En este estudio se evaluó la eficiencia de plaqueo (EOP) bajo condiciones ácidas de siete bacteriófagos (CEV2, 6, 65, 77, 120, Rxpp, XnR) activos contra la cepa O157:H7 NCTC 12900 (ATCC 700728). Los estudios se realizaron en LB agar, conteniendo o no arginina (0,6 mM) o glutamato (0,57 mM), a diferentes valores de pH (4.5, 5.0, 5.5 y 7). Las células sensibles fueron crecidas o/n en medio LB caldo (pH 7.0) o LB adicionado de buffer MES (100 mM, pH 5.0). Similares EOP fueron observadas para cada fago en un rango de pH 5.0 a  7.0 (EOP=1). Sin embargo a pH 4.5, una EOP=1 fue observada solamente para el fago 120, mientras que valores de EOP 10-2 y 10-3  fueron obtenidos para los fagos 6 y 65, y una EOP<10-8 para el resto de los fagos. Los sistemas de resistencia a ácidos dependientes de arginina y glutamato de las células NCTC 12900 no tuvieron efecto en la eficiencia de plaqueo de los fagos. El genoma del fago CEV2 fue secuenciado; es una molécula de 118,321 pares de bases, similar al fago T5 (GenBank: NC 005859), con un contenido de GC del 39.54 %, y una repetición terminal de 9,951 pb. Los marcos de lectura abiertos 156c y 157 de CEV2 muestran gran identidad con las proteínas de la cola pb5 y llp del fago T5, respectivamente, lo que sugiere que ambos fagos interactúan con su huésped a través del mismo receptor (FhuA). Esta predicción fue confirmada experimentalmente. Sin embargo T5 infecta solamente 4 de 7 cepas de la colección EcoR que son infectadas con el fago CEV2, sugiriendo que puede haber un receptor secundario en las cepas resistentes a T5. Las secuencias nucleotídicas de los fagos 65, 6 y 120 están siendo determinadas. La selección de bacteriófagos activos contra E. coli O157:H7 en condiciones de pH ácidos podría contribuir a combatir este importante patógeno de alimentos.