Caracterización inmunoquímica y computacional de Gly m Bd 30K/P34 el alérgeno principal de soja

CANDREVA ANGELA; CURCIARELLO RENATA; GONZALEZ VIRGINIA; PARISI GUSTAVO; PETRUCCELLI SILVANA; DOCENA GUILLERMO

MAR DEL PLATA

Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica y la LVII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2009

SAI

Diferentes productos derivados de los porotos de soja son ampliamente utilizados en la elaboración de la mayor parte de los alimentos, a pesar de que se considere entre los ocho principales alimentos causantes de alergia. La soja posee más de 15 proteínas alergénicas, siendo el principal alergeno la proteína Gly m Bd 30K/P34. En nuestro país no existe información sobre la importancia de esta proteína en alergias a soja, habiendo datos sólo de alergenos de soja aéreos o de reactividad cruzada (RC) de algunas proteínas de soja con proteínas de leche vacuna (LV). La identificación de las proteínas responsables de alergias y el estudio de sus estructuras es importante para entender las bases moleculares de la patología junto con la búsqueda de tratamientos alternativos. A partir de una biblioteca de cDNA de semillas inmaduras de soja se amplificó por PCR el gen codificante para P34; clonado en pENTR SD/TOPO(Invitrogen) y luego transferido al vector pDEST-HIS-MBP. El plásmido obtenido fue introducido en diferentes cepas de E. coli BL21, optimizándose las condiciones de expresión y purificación. Se probó la capacidad de P34 de unirse a anticuerpos IgE por ELISA empleando sueros de pacientes alérgicos a soja. Por immunoblotting se analizó la RC con proteínas de LV empleando: suero policlonal de cabra específico de proteínas de LV, anticuerpos monoclonales anti-caseínas, y sueros de pacientes alérgicos a LV. Se utilizaron también diversas herramientas bioinformáticas con el fin de identificar posibles epitopes IgE inmunodominantes, responsables tanto de la reacción de identidad como de la RC. Se logró un buen rendimiento en la obtención de la proteína recombinante; se comprobó su actividad antigénica y alergénica in vitro, y se demostró la RC de P34 con proteínas de LV. Se obtuvo además un modelo tridimensional de la proteína y se identificaron péptidos de P34 candidatos a ser posibles epitopes.