CLONADO Y EXPRESIÓN DE ALERGENOS DE SOJA RECOMBINANTES. SU APLICACIÓN AL ESTUDIO DE LA REACTIVIDAD CRUZADA ENTRE PROTEÍNAS DE LECHE DE VACA Y SOJA

CURCIARELLO RENATA; CANDREVA ANGELA; GONZALEZ VIRGINIA; SMALDINI PAOLA; FOSSATI ALBERTO; PARISI GUSTAVO; PETRUCCELLI SILVANA; DOCENA GUILLERMO

Mar del Plata

Congreso; LIV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica y la LVII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2009

SAI

La alergia a leche de vaca (ALV) constituye la principal alergia alimentaria que afecta a la población de Argentina y de otras regiones. El único tratamiento efectivo es la restricción dietaria. En nuestro país el empleo de fórmulas que contienen proteínas de soja es muy frecuente, sin embargo, aproximadamente en el 40 % de los pacientes se observan reacciones adversas. Con el objetivo de estudiar si existe una reactividad cruzada entre ambos sistemas que permita explicar la intolerancia clínica observada se clonaron 4 alergenos de soja, en los que previamente observamos una reactividad cruzada inmunoquímica: A4A5B3, Gly mBd 60K o sub unidad α de la β-conglicinina, Gly mBd 30K o p34 y Gly mBd 28K o p28. Se evaluó su reactividad por diferentes métodos inmunoenzimáticos (inmunoblotting, ELISA indirecto y competitivo), empleando antisueros policlonales y anticuerpos monoclonales específicos de caseínas bovinas, o sueros de individuos ALV, y en un modelo murino de ALV. Mediante el uso de herramientas bioinformáticas, se identificó, modeló por homología y clonó un polipéptido (α-CTD) que contendría los epitopes responsables de dicha reactividad cruzada Las proteínas recombinantes, al igual que sus contrapartidas naturales, son reconocidas por los distintos Ac específicos de PLV, por esplenocitos y por mastocitos sensibilizados del modelo murino. Mediante síntesis en fase solida de 3 péptidos de 20 aac se determinó que contienen epitopes inmunodominantes, y finalmente por scanning de alanina se identificaron posiciones de aac críticas para mantener la reactividad inmunoquímica. En el modelo de α-CTD estos 3 epitopes presentan una disposición superficial. En conclusión, confirmamos la reactividad cruzada inmunoquímica mediante el empleo de métodos in vivo e in vitro y 4 alergenos recombinantes, e identificamos 3 epitopes inmunodominantes que podrían ser los responsables de la intolerancia clínica observada en pacientes con ALV. Sobre la base de estos resultados planteamos obtener por ingeniería genética péptidos hipoalergénicos e inducir procesos de tolerancia en el modelo murino de alergia.