DESARROLLO DE ENZIMOINMUNOENSAYOS COMPETITIVOS PARA LA DETECCIÓN DE TRAZAS DE LECHE, SOJA Y HUEVO EN PRODUCTOS ELABORADOS CON HARINA DE ARROZ

CELLERINO KARINA; IRIBARREN ML; DOCENA G; LOPEZ MC; LOPEZ LAURA BEATRIZ

Mar del Plata

Congreso; XVI Congreso Argentino de Ciencia y Tecnología de Alimentos CYTAL 2017; 2017

Introducción y objetivo El objetivo del presente trabajo fue desarrollar tres enzimoinmunoensayos competitivos (EC) para detectar presencia de trazas de leche, soja y huevo en productos elaborados con harina de arroz. Metodología Se trabajó con antisueros policlonales de conejo específicos de proteínas de leche, soja y huevo como anticuerpos primarios. Se realizó la puesta a punto de cada uno de los ensayos. Se ajustó la curva de calibración utilizando concentraciones crecientes de un extracto de leche en polvo descremada, soja o huevo en polvo extraído con buffer Tris-HCL 0,0625M con 3% de SDS y 2% de mercaptoetanol. Se evaluaron los parámetros de validación: límite de detección (LD) y de cuantificación (LC), recuperación y precisión en el día y entre días. Se analizaron sistemas modelo de harina de arroz con 300 y 150ppm de proteína de leche (PL), proteína de soja (PS) o proteína de huevo (PH). Además, se analizaron diez muestras comerciales de productos libres de gluten. Estas muestras fueron también analizadas con kits comerciales de ELISA (Neogen, R-Biopharm y Romer).Resultados Los parámetros de validación obtenidos fueron para leche: linealidad R2: 0,9886; LD: 25,0ppm PL, LC: 51,0ppm PL; precisión en el día: 14,0(n=3), entre días 10,2(n=9) y recuperación: 109,5%. Para soja: linealidad R2: 0,9712; LD: 35,0ppm PS, LC: 60,0ppm PS; precisión en el día: 12,0(n=3), entre días 7,5(n=9) y recuperación: 111,9%. Para huevo: linealidad R2: 0,9818; LD: 6,0ppm PH, LC: 16,0ppm PH; precisión en el día: 1,0(n=3), entre días 12,4(n=9) y recuperación: 106,9%. En las muestras analizadas que declaraban leche, soja y huevo tanto los EC como los kits comerciales detectaron PL, PS y PH. En una muestra que no declaraba leche ni huevo, los EC detectaron PL y PH, esto se corroboró utilizando los kits comerciales. En dos muestras que no declaraban soja, el EC detectó PS, esto se corroboró utilizando los kits comerciales. En una muestra que no declaraba leche, el EC no detectó PL, sin embargo sí se detectaron y cuantificaron dichas proteínas utilizando los kits comerciales. Estos resultados se deben a la diferente sensibilidad de las metodologías utilizadas.Conclusión Dado el bajo costo de los EC desarrollados, éstos se podrían utilizar como método de screening. Cuando esta metodología resulte negativa se debería confirmar con un método más sensible (kit de ELISA comercial) para asegurar la ausencia de leche, soja y huevo. UBACYT20020160100060BAPalabras clave: enzimoinmunoensayo competitivo, leche, soja, huevo, productos libres de gluten.