DESARROLLO DE DOS ENZIMOINMUNOENSAYOS COMPETITIVOS PARA LA DETECCIÓN DE TRAZAS DE SOJA Y DE HUEVO EN PASTAS SECAS

CELLERINO KARINA; RODRIGUEZ VANINA; DOCENA GUILLERMO H.; POLENTA GUSTAVO; LOPEZ LAURA BEATRIZ

CORDOBA

Congreso; VI Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de Alimentos; 2016

El objetivo del presente trabajo fue desarrollar dos enzimoinmunoensayos competitivos, uno para detectar presencia de trazas de soja y otro para detectar presencia de trazas de huevo, ambos en pastas secas. Se trabajó con dos antisueros policlonales de conejo específicos de proteínas de soja y de proteínas de huevo como anticuerpos primarios. Para cada enzimoinmunoensayo se determinó la concentración óptima de antígeno (extracto de proteínas de soja o de huevo) a inmovilizar en la placa y la concentración de anticuerpo primario para ser utilizada en la competencia. Se ajustó la curva de calibración utilizando concentraciones crecientes de un extracto de producto de soja o de huevo entero en polvo extraído con buffer Tris-HCL 0,0625M con 3% de SDS y 2% de mercaptoetanol. El rango de trabajo utilizado en el enzimoinmunoensayo para detectar soja fue 15-420 ppm de proteína de soja (PS) con una adecuada linealidad (R2: 0,988). En el caso del enzimoinmunoensayo para detectar huevo el rango de trabajo utilizado fue 20-630 ppm de proteína de huevo (PH) con una adecuada linealidad (R2: 0,9564). Se evaluaron los parámetros de validación: límite de detección (LD) y de cuantificación (LC), recuperación y precisión en el día y entre días. Con respecto al enzimoinmunoensayo para detectar soja el LD fue 47,0 ppm de PS, el LC fue 76,0 ppm PS, la precisión en el día 12,7 (n=3) y entre días 15,0 (n=9). En el caso del enzimoinmunoensayo para detectar huevo el LD fue 23,0 ppm de PH, el LC fue 45,0 ppm PH, la precisión en el día 2,7 (n=3) y entre días 6,8 (n=9). Se analizaron sistemas modelo de pastas secas con 300 y 150 ppm PS o PH. La recuperación resultó adecuada en ambos casos (106,3% para soja y 104,7% para huevo). Además, se analizaron muestras comerciales de pastas secas con los enzimoinmunoensayos desarrollados y con dos kits comerciales de R-Biopharm. En algunas muestras tanto los enzimoinmunoensayos competitivos como los kits comerciales permitieron la cuantificación de PS y PH, mientras que en otras ni los enzimoinmunoensayos competitivos ni los kits comerciales detectaron PS ni PH. En otras muestras los enzimoinmunoensayos no detectaron PS ni PH sin embargo si se detectaron y cuantificaron dichas proteínas utilizando los kits comerciales de R-Biopharm. Dado el bajo costo de los enzimoinmunoensayos competitivos desarrollados se podrían utilizar como métodos de screening. Cuando esta metodología resulte negativa se debería confirmar con un método más sensible (kit de ELISA comercial) para asegurar la ausencia de PS o de PH.