Estudios de histamina en sistemas biológicos por electroforesis capilar. Desarrollo y Optimización de la metodología

GIORGIERI SERGIO; MARIANGELO JUAN IGNACIO; DOCENA GUILLERMO; DÍAZ LUIS

mendoza

Congreso; Séptimo Congreso Argentino de química analítica; 2013

La histamina o 2-(4-imidazolil)etilamina es una amina orgánica con actividad farmacológica que se origina de la degradación enzimática de la histidina, catalizada por L-histidin descarboxilasa. Este proceso puede producirse en determinadas células que la sintetizan y secretan (mastocitos, basófilos o neuronas) o como consecuencia de la descomposición biológica por enzimas bacterianas de determinados alimentos (pescados, carne, queso, alimentados fermentados, etc). En las células se almacena en los gránulos citoplasmáticos y frente a distintos estímulos (calcio, alergenos, cambios de presión, de temperatura, soluciones hiperosmolares, etc) se induce su liberación al medio extracelular. Su potente acción pro-inflamatoria la ejerce a través de su unión a distintos tipos de receptores localizados en la membrana de distintas células. Se trata de una sustancia hidrofilica que se secreta en muy pequeñas cantidades debido a su gran poder vasoactivo. En circulación se degrada rápidamente por acción de diferentes enzimas (histamina-N-metiltransferasa y la diamina-oxidasa). Para el caso de las enfermedades alérgicas, la histamina es el principal mediador vasoactivo que se libera cuando mastocitos o basófilos son activados por la acción de un alergeno. Esta sustancia se encuentra preformada y almacenada en los gránulos y frente a la activación celular se libera inmediatamente por movilización del citoesqueleto de la célula. Es importante contar con métodos analíticos adecuados, con sensibilidad y eficiencia para dosar histamina en alimentos en descomposición (producto de su degradación) o en fluidos biológicos (producto de su liberación durante los procesos alérgicos). Una metodología simple y precisa, permitiría monitorear los niveles de histamina en alimentos, para el seguimiento de su conservación, o en muestras biológicas para caracterizar el proceso inflamatorio producto de una reacción alérgica (diagnóstico y tratamiento). Se han descripto distintos métodos analíticos como ensayos in vivo o biológicos y métodos químicos. Así en la literatura se pueden encontrar métodos utilizando cromatografía líquida o gaseosa, con distintas técnicas, pero que no se suelen aplicar comúnmente debido a que se debe derivatizar la muestra, proceso durante el cual suele degradarse la histamina. Actualmente, en el mercado existen un reducido número de kits que dosan este metabolito por ELISA. Por lo tanto es importante implementar una metodología sencilla y directa para determinar este analito en forma nativa. En este sentido se planteó la idea de utilizar Electroforesis Capilar (EC), como una técnica accesible para resolver estos problemas con la sensibilidad y eficiencia adecuadas. Esta técnica permite determinar histamina como tal, utilizando volúmenes de muestra muy discretos, con gran poder de resolución para analizar muestras muy complejas. Por otro lado es de destacar los menores tiempos de preparación de la muestra (sin derivatización), de análisis, y por ende menores costos operacionales, en comparación con otras metodologías. Un tema de interés es el procesamiento de la muestra, preservando la estructura nativa de la histamina, principalmente cuando se encuentra en su medio natural, una matriz biológica, para poder determinar sus niveles sin que se halla modificado (oxidación, clivaje, etc). Se presenta un método de detección y cuantificación de histamina en muestras biológicas por electroforesis capilar y la implementación de las condiciones para operar con muestras biológicas, evitando su transformación.