Rol fisiológico de Gal-1 en la sobrevida de enterocitos en situaciones de inflamación

PAPA GOBBI RODRIGO; MUGLIA CECILIA; TOSCANO MARTA; RABINOVICH GABRIEL; DOCENA GUILLERMO H.

Congreso; LIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2011

Las células epiteliales intestinales son un componente fundamental del compartimento epitelial y tienen una activa participación en la regulación de la permeabilidad intestinal y en la modulación del sistema inmune asociado a mucosas. Previamente hemos descripto que galectina-1 (Gal-1) induce la apoptosis de enterocitos humanos y murinos, mecanismo que puede resultar relevante para la sobrevida de estas células durante su maduración a lo largo del eje cripta/vellosidad. El objetivo de este trabajo fue estudiar la apoptosis de enterocitos murinos en diferentes condiciones de inflamación y ahondar en los mecanismos implicados en el proceso de muerte celular. Se aislaron enterocitos de intestino delgado de ratón de las cepas SVJ129 y BALB/c, y se estudió la capacidad de unión a Gal-1 biotinilada e inducción de apoptosis, en cultivo con TNF-α, INF-, IL5 o IL13 por espectrofluorometría, inmunoblotting y por citometría de flujo en ensayos de asa ligada intestinal. Hallamos que enterocitos incubados en presencia de diferentes citoquinas pro-inflamatorias incrementaron su capacidad  de unión a Gal-1 (12  3% cél. positivas en presencia de TNF-α; 55  14%, con INF-; 16  6%, con IL5; 76  8%, con IL13 vs 0,9  0,2% cél. control, p<0,05). Observamos por fluorescencia que en presencia de Gal-1 se produce un incremento en la actividad de caspasa-3 (38   2 vs 22  1 ua/mg de proteína) y un aumento en la actividad caspasa-9 (45  5 vs 22  3 ua/mg de proteína), no así en caspasa-8 (1,25  0,75 vs 3  1 ua/mg), lo cual infiere la participación de la vía  mitocondrial en el mecanismos de muerte celular. Estudios por citometría de flujo y western blot en asa ligada mostraron un significativo aumento en la expresión de las proteínas pro-apoptóticas Bax y Bad (P < 0,05 en ambos casos), junto una disminución de la proteína anti-apoptótica Bcl-2 (P < 0,05). En conclusión, estos resultados sugieren que en condiciones inflamatorias Th1 y Th2 se produce un incremento en la expresión de receptores para Gal-1, lo cual induce una mayor sensibilidad de los enterocitos a la apoptosis, por la vía intrínseca dependiente de caspasas. Estos resultados permitirían explicar la mayor tasa de muerte de estas células descripta en enfermedades alérgicas y enfermedades inflamatorias gastrointestinales, en la cuales la integridad de la barrera epitelial se encuentra alterada.